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药物分离与纯化技术课程

电泳技术--聚丙烯酰胺凝胶电泳

聚丙烯酰胺凝胶电泳—电泳技术大纲1.聚丙烯酰胺凝胶电泳概念2.聚丙烯酰胺凝胶电泳特点3.聚丙烯酰胺凝胶电泳分类

聚丙烯酰胺凝胶电泳—电泳技术聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGE是以丙稀酰胺为单体、亚甲基双丙稀酰胺为交联剂，通过自由基诱导聚合所形成的，具有一定网状结构的凝胶为载体的电泳。（一）聚丙烯酰胺凝胶电泳概念

聚丙烯酰胺凝胶电泳—电泳技术电泳过程中，样品分子的迁移速率，除受自身电荷大小影响外，还与样品分子的大小和形状密切相关（即凝胶载体的分子筛效应），具有很高的分辨率。PAGE可用于蛋白、酶、核酸等生物分子的分离、定性、定量及少量制备，还可用于测定分子量和等电点。（一）聚丙烯酰胺凝胶电泳概念

聚丙烯酰胺凝胶电泳—电泳技术（1）一定浓度范围内凝胶透明（易于电泳过程观察监测），且在270nm无吸收（便于蛋白及核酸电泳后的扫描检测），有弹性，机械性能好；（2）化学性质稳定，不与被分离物质起化学反应，并在很多溶剂中不溶；（二）聚丙烯酰胺凝胶电泳特点聚丙烯酰胺凝胶电泳装置及分离原理

聚丙烯酰胺凝胶电泳—电泳技术（3）对pH和温度变化稳定，操作条件一致时，样品分离重复性好；（4）对样品吸附作用小，且聚合物不带电荷，电渗作用小；（二）聚丙烯酰胺凝胶电泳特点聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离血清蛋白

聚丙烯酰胺凝胶电泳—电泳技术（5）凝胶孔径大小可调控，具有可控分子筛效应；（6）分辨率高（不连续PAGE集浓缩、分子筛和电荷效应一体）。（二）聚丙烯酰胺凝胶电泳特点

聚丙烯酰胺凝胶电泳—电泳技术根据是否存在浓缩效应可分为连续PAGE和不连续PAGE。（1）连续PAGE电泳体系中缓冲溶液pH值及凝胶浓度相同，带电分子在电场的作用下主要依靠电荷和分子筛效应实现分离。（三）聚丙烯酰胺凝胶电泳分类

聚丙烯酰胺凝胶电泳—电泳技术（2）不连续PAGE电泳体系中由于缓冲溶液离子成分、pH、凝胶浓度及电位梯度的不连续性，带电分子在电场中涌动不仅有电荷效应、分子筛效应，还有浓缩效应，因此分离条带的清楚度和分辨率均有所提高。（三）聚丙烯酰胺凝胶电泳分类垂直板电泳装置

聚丙烯酰胺凝胶电泳—电泳技术不连续PAGE系统的组成：①电极缓冲液：pH8.3的Tris-甘氨酸缓冲液；②样品胶：无需专门制备，只需在样品液中加入等体积40%的蔗糖溶液即可；（三）聚丙烯酰胺凝胶电泳分类聚丙烯酰胺电泳分离

聚丙烯酰胺凝胶电泳—电泳技术不连续PAGE系统的组成：③浓缩胶：pH6.7Tris-HCl介质，T=2-3%的大孔胶，无筛分效果；④分离胶：pH8.9Tris-HCl介质，T=7.5%的小孔胶，有筛分效果。（三）聚丙烯酰胺凝胶电泳分类聚丙烯酰胺电泳分离

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