分子克隆工具酶及其应用.pptxVIP

基因工程工具酶及应用

工具酶种类限制性内切酶—用于DNA分子的特异切割DNA甲基化酶—用于DNA分子的甲基化修饰核酸酶—用于DNA和RNA的非特异性切割核酸聚合酶—用于DNA和RNA的合成核酸连接酶—用于DNA和RNA的连接核酸末端修饰酶—用于DNA和RNA的末端修饰其它酶类—用于生物细胞的破壁、转化、核酸纯化、检测等。

限制性内切核酸酶

Restrictendonuclease

限制性内切酶的发现历史010203WernerArber于1962-1968年发现，1968年分离到I型限制酶。细菌限制修饰系统的发现Smith和Wilox于1970年首次从流感嗜血杆菌（H.influenzae）中发现并分离到HindII限制酶。限制酶HindII的发现Nathans（1971年）用HindII绘制SV40的限制酶谱。SV40限制图谱和转录图谱的绘制

限制修饰系统的种类I型：由三个基因编码，即：hsdR；hsdM；hsdS(hostspecificityforDNArestrictionmodificationandspecificity)位于染色体上，三个基因构成一个复合体(同一操纵子)，限制酶需要ATP、Mg2+、SAM(S-腺苷蛋氨酸)。II型：限制与修饰基因产物独立起作用，在E.coli中这两种基因位于质粒上。III型：修饰酶与I型酶相同，hsdM与hsdS基因产物结合成一亚单位，限制酶是独立存在的。上述三个系统中，只有II型限制酶与甲基化酶具有相当高的核苷酸识别特异性，被广泛用于基因工程中。

定义：广义指上述三个系统中的限制酶；狭义指II型限制酶。命名：限制酶由三部分构成，即菌种名、菌系编号、分离顺序。例如：HindIII前三个字母来自于菌种名称H.influenzae，“d”表示菌系为d型血清型；“III”表示分离到的第三个限制酶。EcoRI—EscherichiacoliRIHindIII—HaemophilusinfluensaedIIISacI(II)—StreptomycesachromagenesI(II)限制性内切酶的定义、命名

第一个字母取自产生该酶的细菌属名，用大写；第二、第三个字母是该细菌的种名，用小写；第四个字母代表株；用罗马数字表示发现的先后次序。命名EcoRI属种株序EscherichiacoliRY13株大肠杆菌RY13株的第一种酶

限制酶的特点单击此处添加正文，文字是您思想的提炼，为了演示发布的良好效果，请言简意赅地阐述您的观点。您的内容已经简明扼要，字字珠玑，但信息却千丝万缕、错综复杂，需要用更多的文字来表述；但请您尽可能提炼思想的精髓，否则容易造成观者的阅读压力，适得其反。正如我们都希望改变世界，希望给别人带去光明，但更多时候我们只需要播下一颗种子，自然有微风吹拂，雨露滋养。恰如其分地表达观点，往往事半功倍。当您的内容到达这个限度时，或许已经不纯粹作用于演示，极大可能运用于阅读领域；无论是传播观点、知识分享还是汇报工作，内容的详尽固然重要，但请一定注意信息框架的清晰，这样才能使内容层次分明，页面简洁易读。如果您的内容确实非常重要又难以精简，也请使用分段处理，对内容进行简单的梳理和提炼，这样会使逻辑框架相对清晰。识别顺序和酶切位点MboINGATCN；AvaIIGG(A/T)CCBamHIGGATCCNotIGCGGCCGC；SfiIGGCCNNNNNGGCCFokI5’-GGATG(N)9-3’--识别4~8个相连的核苷酸单击此处添加正文，文字是您思想的提炼，为了演示发布的良好效果，请言简意赅地阐述您的观点。您的内容已经简明扼要，字字珠玑，但信息却千丝万缕、错综复杂，需要用更多的文字来表述；但请您尽可能提炼思想的精髓，否则容易造成观者的阅读压力，适得其反。正如我们都希望改变世界，希望给别人带去光明，但更多时候我们只需要播下一颗种子，自然有微风吹拂，雨露滋养。恰如其分地表达观点，往往事半功倍。当您的内容到达这个限度时，或许已经不纯粹作用于演示，极大可能运用于阅读领域；无论是传播观点、知识分享还是汇报工作，内容的详尽固然重要，但请一定注意信息框架的清晰，这样才能使内容层次分明，页面简洁易读。如果您的内容确实非常重要又难以精简，也请使用分段处理，对内容进行简单的梳理和提炼，这样会使逻辑框架相对清晰。-富含GC

--对称性—双对称EcoRI5’-GAATTC-3’