基于转录组测序技术的电磁辐射对神经元影响的机制研究.docVIP

目录

TOC\o1-3\h\z\u摘要 1

ABSTRACT 3

1前言 5

2研究对象与方法 5

2.1研究对象 5

2.2实验分组 5

2.3UHPLC-MS/MS靶向代谢学检测神经递质 6

2.4大鼠原代海马神经元总蛋白提取 6

2.5WesternBlot检测蛋白表达 7

2.6WB结果图像分析 8

2.7RNA提取、反转录和定量PCR 8

2.8转录组测序 9

2.9数据分析 10

3电磁辐射对神经元神经递质的影响研究 10

3.1电磁辐射后大鼠原代海马神经元胆碱类神经递质含量的变化 10

3.2电磁辐射后大鼠原代海马神经元单胺类神经递质含量的变化 10

3.3电磁辐射后大鼠原代海马神经元氨基酸类神经递质含量的变化 12

3.4电磁辐射后大鼠原代海马神经元GSH和Melatonin含量的变化 15

4电磁辐射对神经元钙相关蛋白及其激酶表达的影响 15

4.1电磁辐射后大鼠原代海马神经元CaMKⅡα、CaMKⅡβ、CaMKⅡγ和CaMKⅡδ蛋白表达变化 15

4.2电磁辐射后大鼠原代海马神经元CaMKⅡα、CaMKⅡβ、CaMKⅡγ和CaMKⅡδmRNA表达变化 17

5基于转录组测序的电磁辐射对神经元影响的机制研究 18

5.1电磁辐射后原代海马神经元转录组表达谱 18

5.2电磁辐射后大鼠原代海马神经元差异基因验证结果 27

6讨论 29

6.1电磁辐射对神经元神经递质的影响研究 29

6.2电磁辐射对神经元钙相关蛋白及其激酶表达的影响 30

6.3基于转录组测序的电磁辐射对神经元影响的机制研究 31

7结论 32

7.1电磁辐射对神经元神经递质的影响研究 32

7.2电磁辐射对神经元钙相关蛋白及其激酶表达的影响 32

7.3基于转录组测序的电磁辐射对神经元影响的机制研究 33

参考文献 33

致谢 35

第PAGE\*Arabic7页共=NUMPAGES40-337页

基于转录组测序技术的电磁辐射对神经元

影响的机制研究

摘要

目的探讨电磁辐射对神经元的作用及机制，为电磁辐射对神经元的调控及应用提供依据。方法提取原代海马神经元，按照随机分配的原则将其分为对照组和辐射组，待生长到第七天时对辐射组进行电磁辐射，于辐射后即刻，通过UHPLC-MS\MS（超高效液相色谱-质谱）靶向代谢学检测神经元中胆碱类、单胺类等神经递质的含量；使用Westernblot检测CaMKⅡα、CaMKⅡβ、CaMKⅡγ、CaMKⅡδ蛋白表达；使用RT-PCR检测CaMKⅡα、CaMKⅡβ、CaMKⅡγ、CaMKⅡδmRNA表达；通过转录组测序技术检测原代海马神经元电磁辐射后的差异基因；利用RT-PCR验证差异基因。结果①与对照组相比，辐射组大鼠原代海马神经元Ach含量显著降低（P＜0.01）、OA含量显著降低（P＜0.001）、LDOPA含量显著降低（P＜0.001）、Spd含量明显降低（P＜0.05）、Thr含量显著降低（P＜0.05）；5HIAA含量明显增加（P＜0.05）、Hist含量明显增加（P＜0.05）、Put含量明显增加（P＜0.05）、5HT含量明显增加（P＜0.05）、Cys含量明显增加（P＜0.05）、Gln含量明显增加（P＜0.05）、Ser含量明显增加（P＜0.05）；②与对照组相比，辐射组大鼠原代海马神经元CaMKⅡβ和CaMKⅡδ蛋白表达明显升高（P＜0.05），CaMKⅡα（P＜0.01）和CaMKⅡβ（P＜0.001）mRNA表达显著增加，CaMKⅡγmRNA表达明显降低（P＜0.05）；③共捕捉到差异基因303个，其中上调基因139个，下调基因164个。与对照组相比，辐射组大鼠原代海马神经元Creb3l4、TACR3、GLRA1、Ttll10mRNA表达明显增加。结论电磁辐射可通过影响神经递质释放、钙相关蛋白及基因表达提升神经元活性，同时影响神经元转录表达谱改变，其中Creb3l4、TACR3、GLRA1、Ttll10基因可能为电磁辐射敏感的转录因子。

关键词：电磁辐射；神经元；神经递质；钙相关蛋白；转录组测序

Mechanismstudyoftheeffectofelectromagneticradiationonneuronsbasedontranscriptomesequencingtechnology

ABSTRACT

ObjectiveToinvestigatetheeffectandme