发酵食品生产技术蒋慧亮90课件.pptx

;;诱变育种;;;诱变育种的一般步骤;(一)出发菌株的选择;诱变育种;诱变育种;在诱变育种中，处理材料一般采用生理状态一致的单倍体、单核细胞，即菌悬液的细胞应尽可能达到同步生长状态——生理活性一致，称为同步培养。

细胞的生理状态对诱变处理会产生很大的影响。细菌在对数期诱变处理效果较好；霉菌或放线菌的分生孢子一般都处于休眠状态，所以培养时间的长短对孢子影响不大，但稍加萌发后的孢子则可提高诱变效率。;细菌一般要求培养至对数生长期，此时群体生长状态比较同步，比较容易变异，重复性较好。

如亚硝基胍诱变时作用于复制叉处，生长旺盛的细胞中复制叉点较多，碱基类似物也在此时期比较容易进入DNA链中。

霉菌处理使用分生孢子，应该将分生孢子在液体培养基中短时间培养，使孢子孵化，处于活化状态，并恰好未形成菌丝体，易于诱变。

;（二）单细胞(或单孢子)悬液的制备;;（三）诱变处理;常用诱变剂有两大类：

物理诱变剂

化学诱变剂

;物理诱变剂;物理诱变剂;诱变育种;诱变育种;30;31;(四)中间培养;(五)分离和筛选;紫外线诱变

;紫外线诱变

;紫外线诱变

;紫外线诱变

;实验二：产酶菌株的诱变实验;实验操作;诱变育种;诱变育种;诱变育种;诱变育种;诱变育种;诱变育种;一、菌种的衰退

;菌种的衰退、复壮与保藏;1、菌种保藏的目的

①菌种存活，不丢失，不污染

②防止优良性状丧失

③随时为生产、科研提供优良菌种;2、菌种保藏的方法;斜面低温保藏法

方法：接种适宜斜面培养基→培养→4℃保藏

原理：低温下，微生物代谢强度明显下降

适用：各大类

保藏期：3-6个月

缺点：保存期短，传代多，易退化

;菌种的衰退、复壮与保藏;半固体穿刺保藏法

方法：适宜半固体→培养→4℃保藏

原理：缺氧、低温

适用：好气性细菌，酵母等

保藏期：6-12个月

步骤：

用接种针从原菌种斜面上挑取少量菌体，从柱状培养基中心自上而下刺入，至培养基的1/2处，待微生物生长良好后覆盖2-3mm无菌液体石蜡.石蜡可防止培养基失水又隔绝氧气,降低代谢.但不适用于可以石蜡为碳源的微生物.;??种的衰退、复壮与保藏;砂土管干燥保藏法

方法：将干燥砂粒与细土混合后灭菌制成砂土管，然后接种保藏。

原理：无营养，缺氧，干燥

适用：产孢子的丝状真菌、放线菌；有芽孢的细菌

保藏期：2-10年或更长

;河沙;无菌条件下打开沙土管，取部分沙土粒于适宜的斜面培养基上，长出菌落后再转接一次。或取沙土粒于适宜的液体培养基中，增殖培养后再转接斜面。;真空冷冻干燥保藏法：

方法：菌种培养→用保护剂悬浮→

加入安醅管中→低温冻结（-25—-40℃）→

抽真空→真空封口→4-5℃保藏

措施：低温、干燥，缺氧，保护剂

适用：各大类

保藏期：5-10年或更长;步骤;菌种的衰退、复壮与保藏;液氮超低温保藏法

方法：菌悬液→加入保护剂→分装至安醅管中（0.2-1cm菌悬液）→逐步降温至-25℃→液氮罐（-196℃）保藏

措施：低温、加保护剂（10%甘油）

适用：范围广泛

保藏期：一般2～3年，长则9年。

;菌种冻存管;7种常用菌种保藏方法的比较;菌种保藏机构

Ex：美国的标准菌种保藏所（ATCC）

美国农业部农业研究服务部（ARS）

英国国立标准菌种保藏所（NCTC）

我国：1普通微生物菌种保藏管理中心（CCGMC）

2农业微生物菌种保藏管理中心（ACCC）

3工业微生物菌种保藏管理中心（CICC）

4医学微生物菌种保藏管理中心（CMCC）

5抗生素菌种保藏管理中心（CACC）

6兽医微生物菌种保藏管理中心（CVCC）;实验目的：将选育出的产酶量较大的菌株进行菌种保藏，以便后续的研究

;菌种保藏的原理：

首先，选用优良的纯种（最好是休眠体，如分生孢子、芽胞等）

其次，创造微生物代谢不活波，生长繁殖受抑制，难以发生突变的环境条件（其环境要素是干燥、低温、缺氧、缺营养以及添加保护剂等）

再次，添加保护剂或酸碱中和剂，避免保藏过程中细胞受伤。