药品检验检测机构-光度鲎试剂标准草案（征求意见稿）.pdf

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药品检验检测机构光度检测技术鲎试剂质量标准

1范围

本标准旨在规定光度检测技术鲎试剂的质量标准。包括鲎试剂的性状、鉴别、检查、检测限、

标准曲线可靠性、支间差异、准确度、重复性、储藏等。本标准适用于药品检验检测机构以及涉及

注射剂原辅料、包材及制剂的生产企业等机构开展细菌内毒素检验检测和科研工作。

2规范性引用文件

中华人民共和国药典。

3术语和定义

光度检测技术鲎试剂：本品为鲎科动物中国鲎（Tachypleustridentatus）或美洲鲎（Limulus

polyphemus）的血液变形细胞溶解物的冷冻干燥品。本品含C因子（FactorC）、B因子（Factor

B）、G因子（FactorG）、凝固酶原（Proclottingenzyme）、凝固蛋白原（Coagulogen）、

显色基质等。其中C因子、B因子及G因子均为丝氨酸蛋白酶；显色基质为显色法鲎试剂特有成

分。本品可被细菌内毒素激活产生凝集或显色反应。

光度检测技术：包括浊度检测法和显色检测法。浊度检测法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过

程中的浊度变化而测定内毒素含量的方法。根据检测原理，可分为动态浊度法和终点浊度法。动态

浊度法是检测反应混合物的浊度到达某一预先设定的吸光度或透光率所需要的反应时间，或是检测

浊度增加速度的方法。终点浊度法是依据反应混合物中的内毒素浓度和其在孵育终止时的浊度（吸

光度或透光率）之间存在的量化关系来测定内毒素含量的方法。显色检测法系利用检测鲎试剂与内

毒素反应过程中产生的凝固酶使特定底物释放出呈色团的多少而测定内毒素含量的方法。根据检测

原理，分为动态显色法和终点显色法。动态显色法是检测反应混合物的特定波长吸光度或透光率达

到某一预先设定的检测值所需要的反应时间，或检测色度增长速度的方法。终点显色法是依据反应

混合物中内毒素浓度和其在孵育终止时释放出的呈色团的量之间存在的量化关系来测定内毒素含量

的方法。

光度检测鲎试剂的检测限：在检测限的范围内应可制备出符合要求的标准曲线

细菌内毒素标准品：细菌内毒素标准品分为国家标准品和工作标准品。其中国家标准品系自大

肠埃希菌提取精制，并以细菌内毒素国际标准品标定其效价，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度、

标定细菌内毒素工作标准品的效价，干扰试验及检查法中编号B和C溶液的制备、凝胶法中鲎试剂

灵敏度复核试验、光度测定法中标准曲线可靠性试验。细菌内毒素工作标准品系以细菌内毒素国家

标准品为基准标定其效价，用于干扰试验及检查法中编号B和C溶液的制备、凝胶法中鲎试剂灵敏

度复核试验、光度测定法中标准曲线可靠性试验（编号B和C的定义见《中国药典》四部附录1143

细菌内毒素检查法）。

4质量标准

4.1性状

本品为白色或类白色冻干块状物或粉末，在水中易溶。

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4.2鉴别

动态法鲎试剂：取本品，按标示装量溶解后，按反应体积取样，加入相应体积的0.5EU/ml的标准内

毒素溶液，在3600秒内应生成典型的S型或反S型反应曲线。

终点法鲎试剂：取本品，按标示装量溶解后，按反应体积取样，加入相应体积0.5EU/ml或

0.05EU/ml（当标示检测限为0.01EU/ml-0.1EU/ml时）的内毒素标准溶液，恒温反应相应时间，终止

反应后溶液应显浅黄色，偶氮化后应显玫瑰红色。

4.3检查

4.3.1水分

0.3ml和以上装量规格的鲎试剂，照水分测定法（《中国药典》2025年版四部通则0832第一法2

库仑滴定法）检测，含水分应不超过5%。0.3ml以下装量鲎试剂可采用定期核查鲎试剂检测限的形式，

考察水分对鲎试剂活性的影响。

4.3.2缓冲能力

任意取5％葡萄糖注射液、氯化钠注射液或灭菌注射用水，加稀盐酸调节pH值为2.90~3.00，取此

溶液适量与等量鲎试剂溶液混匀，pH值应为6.00~8.00。

4.4检测限

动态法鲎试剂：阴性对照的反应时间减去标示检测限最低浓度点的反应时间应≥100秒；标示检