分子生物学研究方法-PCR.pptxVIP

分子生物学研究方法;PCR技术在医学中的应用;一.多聚酶链反应(PolymeraseChainReaciton,PCR)

（一）原理;;;;;;;二PCR的应用;;(二）利用PCR对基因功能进行分析和改造;(三）基因拼接;（四）Invitroevolutionofgene-codingprotein;DNAShuffle;

怎样提高高保真的重组体

1．在步骤2）使用Mn2+而不是Mg2+

2．在PCR步骤使用高保真的耐热DNA聚合酶;PCRRandomMutagenesis;怎样获得理想的突变率;2．突变偏向（mutationalbias)

评估方法：1）transition/transversion

Transition：嘌呤突变为嘌呤，嘧啶突变为嘧啶

Transversion:嘌呤突变为嘧啶

2）A或T转变为G或C的程度，或者是反过来

ATGC/GCAT

;（五）．基因表达及其调控的分析;;2,Chromatinimmunoprecipitation(ChIP)

主要应用:研究转录因子在体内与其顺式作用元件的结合

原理：;3.DNA甲基化的分析;谢谢大家！