基因治疗的原理 (2).ppt

（2）受体介导转移技术将DNA与细胞或组织亲和性的配体偶联，可使DNA具有靶向性。这种偶联通常通过多聚阳离子（如多聚赖氨酸）来实现。多聚阳离子与配体共价连接后，又通过电荷相互作用与带负电荷的DNA结合，将DNA包围，只留下配体暴露于表面。这样形成的复合物可被带有特异性受体的靶细胞吞饮，从而将外源DNA导入靶细胞。第27页，共46页，星期日，2025年，2月5日（3）基因直接注射技术不需要进行基因工程的繁琐操作，直接将裸露基因DNA注入动物肌肉或某些器官组织内。动物实验表明：接受注射外源DNA的小鼠能够按其基因编码合成相应的蛋白质，并能维持数月之久。1.将促进心脏血管生长的基因直接注入实验鼠的心脏，可使其心脏壁内毛细血管增加30%～40%；2.将胰岛素基因直接注入鼠骨骼肌细胞，能分泌糖尿病所缺少的胰岛素；3.肌内注射凝血因子Ⅸ基因，可产生血友病所需的凝血因子等等。第28页，共46页，星期日，2025年，2月5日基因直接注射法的优点1.制备具有调控部件的质粒DNA重组体的技术较容易；2.排除病毒载体可能潜在的致癌性或其他副作用；3.导入的基因不需整合即可表达，避免了逆转录病毒载体导入整合后，一旦发生副作用不易中止或逆转的缺点；4.基因直接注射法可反复使用，而病毒载体则可能诱导体内免疫应答，致使反复治疗效果下降。第29页，共46页，星期日，2025年，2月5日三、基因干预第30页，共46页，星期日，2025年，2月5日基因干预的种类：1.反义RNA(antisenseRNA)2.干扰RNA(RNAinterference)3.核酶(ribozyme)第31页，共46页，星期日，2025年，2月5日（一）反义RNA1.反义RNA与基因表达调控利用反义RNA对体外培养的细胞进行基因表达调控，通常采用的方法有两种：（1）体外合成反义RNA，直接作用于培养细胞，细胞吸收RNA后，发挥作用。（2）构建能转录反义RNA的重组质粒，将质粒转入细胞，转录出反义RNA而发挥作用。第32页，共46页，星期日，2025年，2月5日2.受体介导反义RNA技转移术①受体介导的RNA转移十分专一，而且效率高；②被转移的RNA是被保护的，与周围环境之间存在多聚赖氨酸的保护层,可以抵抗环境中的核酸酶的降解作用。将脱唾液酸血清类粘蛋白（ASGP）与多聚赖氨酸（PL）共价连接，得到ASGP-PL复合物，成为运载核酸的工具。ASGP-PL反义RNA复合物可以专一性地被肝细胞表面的ASGP受体所识别，并吞噬到肝细胞中，反义RNA进入肝细胞后，可被逐渐释放出来发挥作用。借助受体介导DNA转移方法把DNA换成反义RNA，就可以实现受体介导的反义RNA的转移。第33页，共46页，星期日，2025年，2月5日3.反义RNA的应用前景受体介导的反义RNA基因治疗有其自身的优点，而在一定程度上补充了转基因治疗的不足。（l）安全性高（2）反义RNA设计和制备方便（3）具有剂量调节效应（4）能直接作用于一些RNA病毒反义RNA只作用于特异的mRNA分子，不改变所调节基因的结构。反义RNA分子无论怎样修饰，最终将在细胞内部被降解，不留“残渣”。在治疗RNA病毒感染性疾病时，受体介导的反义RNA基因治疗比一般的DNA基因治疗有更大的优势。利用反义RNA可以直接作用于病毒RNA，阻断RNA病毒的繁殖。第34页，共46页，星期日，2025年，2月5日（二）干扰RNA实验结果显示，有义链RNA（senseRNA）或反义链RNA（antisenseRNA）均能抑制线虫基因的表达，双链RNA比单链RNA更为有效。将特异的双链RNA注入线虫体内可抑制有同源序列的基因的表达。得到的结果是有义链RNA和反义链RNA都同样阻断基因表达途径。这与传统上对反义RNA技术的解释正好相反。而且其抑制基因表达的效率比反义RNA至少高2个数量级。1.RNA干扰现象RNA干扰（RNAinterference，RNAi）是一种由双链RNA诱发的基因沉默现象。在此过程中，与双链RNA有同源序列的信使RNA（mRNA）被降解，从而抑制该基因的表达。对RNA干扰的认识来源