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原代干细胞体外培养技术及鉴定方法研究
目录
一、内容简述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3
（一）背景介绍．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3
（二）研究意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5
二、原代干细胞体外培养技术．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6
（一）细胞分离与培养基的选择．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7
细胞分离方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10
培养基的种类与特点．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11
（二）培养条件优化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13
温度与pH值．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14
营养成分的添加．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15
（三）细胞生长曲线与克隆形成能力．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17
细胞生长曲线的绘制．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20
克隆形成能力的评估．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22
三、原代干细胞鉴定方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23
（一）形态学鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24
显微镜下细胞形态观察．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25
细胞大小与形态特征．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26
（二）细胞表面标志物检测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27
CD分子标记物的检测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28
其他相关标志物的检测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29
（三）细胞生物学功能鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30
细胞增殖能力检测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31
细胞凋亡与周期检测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33
传代稳定性与克隆化能力评估．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36
四、实验材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．37
（一）实验材料．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．38
原代干细胞来源．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39
培养基与添加剂．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41
（二）实验方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．43
细胞分离与培养．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．44
鉴定方法的建立与优化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．45
数据分析与处理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．47
五、结果与讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．49
（一）原代干细胞体外培养结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．50
细胞形态与生长特性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．50
细胞增殖与克隆形成能力．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．52
（二）原代干细胞鉴定结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．53
形态学鉴定结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．58
表面标志物检测结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．59
生物学功能鉴定结果．．．．．．．．．．．．
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