水中微生物的测定.pptVIP

实验

水中细菌总数的测定;实验目的;实验原理;如果水源被粪便污染，那么有可能也被肠道病原菌污染而引起伤寒、痢疾、霍乱等肠道病的流行，但肠道病原菌在水中数量较少，又易变异与死亡，故从水中特别是自来水中别离出病原菌，常常有困难。

而大肠菌群是肠道好氧菌中最普遍和数量最多的一种，所以常将其作为粪便污染的标志，即根据水中大肠菌群的数目来判断水源是否被粪便所污染，并间接推测水源受肠道病原菌污染的可能性。一般规定每1000毫升自来水中大肠菌群不超过三个。;实验材料;实验步骤;细菌总数测定

1〕自来水

吸取1ml水样与平皿内冷却至45℃的培养基混匀，于37℃下培养24h计数，共两皿。同时做不接水样的空白皿对照试验。

2〕池水、河水或湖水

采用平板菌落计数法：一般中等污秽水样，取10－1、10－2、10－3三个稀释度，污秽严重的取10－2、10－3、10－4三个稀释度。

最后三个稀释度的稀释水样重复上述自来水的细菌测定试验。;水样稀释过程示意图;菌落计数方法

〔1〕计算相同稀释度的平均菌落数

有较大片菌苔生长时，弃用；以无片菌苔生长的平皿计数。

假设片菌苔大小不到培养皿的一半，其余一半分布均匀，将此一半计数×2

〔2〕选择平均菌落数在30～300之间的平板

只有一个符合此范围时，以该平均菌落数乘稀释倍数。

有两个在30～300间时，按两者菌落总数比值决定：比值小于2，取平均；比值大于2，取较小的菌落总数。

〔3〕所有菌落数均大于300，取稀释度最高的平均菌落数乘稀释倍数。

〔4〕所有菌落数均小于30，取稀释度最低的平均菌落数乘稀释倍数。

〔5〕所有菌落数均不在30～300之间，以最接近30或300的平均菌落数乘稀释倍数。;计算菌数落总数方法举例;五、实验报告

1．结果

〔1〕自来水;〔2〕池水、河水或湖水等;大肠菌群检查－－－滤膜法

过滤水样

用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘局部，将粗糙面向上，帖放在已灭菌的滤床上、，固定好滤器，将100mL水浴(如水样含菌数较多，可减少过滤水样量，或将水样稀释)注入滤器中，翻开滤器阀门，在负0.5大气压下抽滤。;培养

水样滤完后，再抽气约5s，关上滤器阀门，取下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘局部，移放在品红亚硫酸钠培养基(36.1.3.1)上，滤膜截留细菌面向上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者间不得留有气泡，然后将平皿倒置，放入37℃恒温箱内培养22～24h。;观察结果

挑出符合以下特征菌落进行革兰氏染色、镜检。

紫红色，具有金属光泽的菌落。

深红色，不带或略带金属光泽的菌落

淡红色，中心色较深的菌落。

凡革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，再接种乳糖蛋白胨培养基液，于37℃培养24h，有产酸产气者，那么判定为总大肠菌群阳性。;计算滤膜上生长的总大肠菌群数

水中总大肠菌群数/个L-1＝滤膜生长的菌落数×1000÷过滤水样量

〔滤膜上菌落数以20～60个/片为适宜〕;实验结果;问题与讨论