核移植技术与动物克隆.pptVIP

第一步取妊娠期的6岁母绵羊（FinnDorset白品种母羊）的乳腺细胞作核供体细胞，用饥饿法使其进入休眠状态而使全部基因具有活性。第二步注射促性腺激素，促使母羊（SottishBlackface黑面母绵羊）排卵，28~33小时取其未受精卵，快速去核，放入10%FCS、1%FCS和0.5%FCS连续5天，使其进入G0期做受体细胞。第三步乳腺细胞与无核卵放入同一培养皿中，在微电流的作用下，将乳腺细胞融入卵中，形成一个含有新的遗传物质的卵细胞。第六章

核移植技术与动物克隆山东师范大学生命科学学院01动物克隆是一种通过核移植过程进行无性繁殖的02技术。发育早期的动物胚胎细胞，或成年动物的体03细胞，经显微手术移植到去掉细胞核的卵母细胞中04之后，在适当的条件下，可以重新发育成正常胚05胎。这种胚胎被移植到生殖周期相近的母体之中，06可以发育成为正常动物个体。经过核移植而产生的07动物，其遗传结构与细胞核供体完全相同。这种不08经过有性生殖过程，而是通过核移植生产遗传结构09与细胞核供体相同动物个体的技术，就叫做动物克10隆。一、什么是动物克隆？的胚胎，叫做胚胎克隆。02体细胞克隆：使用的核供体细胞来自动物体，叫做03胚胎克隆：使用的核供体细胞如果来自多细胞阶段01体细胞克隆。041938年Spemann最先提出将多细胞胚胎的每一个细胞核移植到去掉核的卵母细胞中，使它们重新发育成胚胎的设想。1952年，Briggs和King沿用Spemann的思路和实验技术，首次获得两栖动物美洲豹蛙胚胎细胞核移植的后代．核供体为囊胚期的胚胎细胞——实验成功核供体为原肠胚期的中胚层和内胚层细胞——实验失败二、两栖类细胞核移植蟾原肠内胚层细胞核移植，培育出可育的非洲爪蟾．1958年到1962年，英国剑桥大学的JohnGurdon和Machineer利用爪01试验，蛙卵发育成了蝌蚪。1970年JohnGurdon以同样的方法，用青蛙脚蹼角质化细胞进行移核02三、鱼类的核移植1989年，童第周、牛满江又将鲫鱼胚胎细胞核移入鲤鱼去核的未受精卵中，实现了不同种间的核质杂交，成功地无性繁殖了“鲤鲫核鱼”新品种。四、哺乳类的细胞核移植1977年，美国缅因州巴尔港的杰克逊实验室用“亚无性繁殖”的方式，培育出7只单亲小鼠。A将卵细胞受精，在精、卵核融合之前，把精核去掉，然后放入加有适量细胞松驰B的溶液中。B经此番处理的卵细胞的染色体复制后出现了两个核，将此双核细胞放入正常培养液中培养。C卵中的双核细胞自动融合，并且细胞开始分裂。D将此种胚胎移入母鼠子宫培育。E生产出7只单亲小鼠。五、核移植技术的一般操作程序核移植克隆哺乳动物的技术操作过程主要包括核受体和核供体的处理和制备、核移植、重组胚的体外或体内培养、核移植胚胎移入代孕母畜（寄母）等步骤。去核卵母细胞常常作为核移植的受体细胞。这是因为在卵母细胞的细胞质含有某种特定的因子，可以使移植核中所含有的基因表达程序发生重新排列，使已经分化了的细胞重新回到发育过程的原点，同受精卵一样开始个体发育过程。01卵母细胞的来源有两种方式：一是用激素对雌体进行超排处理，从输卵管冲出体内成熟的MⅡ卵母细胞。二是从屠宰场收集卵巢，吸出滤泡中的卵丘—卵母细胞复合体(COCs)，在体外培养成熟后作为受体。021．核受体细胞的准备在核移植操作中，细胞核供体细胞首先必须是完整的二倍体，该细胞必须保持有供体动物完整的基因组；其次，供体细胞核必须能够在受体细胞质的作用下，产生细胞分化过程的倒转，变得如同刚刚受精的合子一样，能重新完成从受精到发育成一个正常动物个体的全过程。供体细胞主要有两大类：胚胎卵裂球和体细胞。另外，核供体细胞的来源还有胚胎干细胞和胎儿成纤维细胞。2．核供体细胞的准备制备转基因克隆动物，?进行生物药物生产；01培育优良畜种，扩大良种种群；02开展异种动物克隆，拯救濒危动物；03与干细胞技术结合，开展治疗性克隆04利用核移植技术，研究生物学的基本问题。05六、核移植技术的应用七、克隆羊与体细胞核移植a.胚胎細胞株,b.胚胎纖維母細胞

c.乳腺上皮細胞,d.PCRmicrosatellite