植物组织培养技术流程.ppt

§1实验室仪器设备

§2实验基本操作

§3植物组织培养流程植物组织培养操作流程1实验室仪器设备激素母液的配制6-BA、KT、ZT等浓度为0.5mg/ml；NAA浓度为0.1mg/mlMS母液的配制母液的配制大量元素(20倍)、微量元素(1000倍)、铁盐(100倍)、有机元素(100倍)2实验基本操作培养基的配制与灭菌12MS+6-BA2mg/L+琼脂粉5.5mg/L+糖30mg/LpH6.01L1.培养基配制适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水、棉塞、纸等。121℃维持20～30min

注意点：加足水、排尽气、气压降到0时，才能开盖。2.培养基灭菌三、外植体的消毒与无菌操作消毒剂使用浓度(%)消毒时间(min.)效果残液去除难易乙醇70-750.1-3好易新洁尔灭10～205～30好易氯化汞0.1～12～15最好最难过氧化氢10～125～15较好最易抗菌素4～50mgl-130～60较好较难次氯酸钙/纳9～105～30好易1.外植体消毒正确错误取流水冲洗（至少5min）过的外植体，用一定的消毒剂浸泡消毒，用无菌水冲洗3-4次，放入无菌培养皿中，用无菌的接种器械进行分离、切割或其他处理。用75%的酒精喷洒超净工作台。

打开室内及超净工作台用紫外灯、无菌风及刀剪镊杀菌20min-30min。注意：台面上的用品不要放置太多或重叠放置，以免降低灭菌效果。

关空间紫外灯，过5-10min进入缓冲间，以75%洗手和手臂，进入接种台。

关闭超净台紫外灯，打开照明灯。

试验操作。

完毕后关闭照明灯、刀剪镊、无菌风开关。

收拾无菌纸、材料瓶等。。2.无菌操作注意（1）进行培养时，动作要准确敏捷，但又不必太快，以防空气流动，增加污染机会。（2）不能用手触及已消毒器皿，如已接触，要重新消毒。（3）为拿取方便，工作台面上的用品要有合理的布局，原则上应是右手使用的东西放置在右侧，左手用品在左侧。（4）工作由始至终要保持一定顺序性，组织或细胞在未做处理之前，勿过早暴露在空气中。同样，培养液在未用前，不要过早开瓶；用过之后如不再重复使用，应立即封闭瓶口，直立可增加落菌机会。接种茎段：注意形态学下端插入培养基内，而形态学上端露于空气中正确错误**