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用酶法制备藏羊血食用蛋白粉的研究

一、1.研究背景与意义

(1)藏羊作为我国青藏高原特有的畜种，具有抗逆性强、肉质鲜美等特点，其血液中含有丰富的蛋白质资源。随着我国人口的增长和人们生活水平的提高，对蛋白质的需求量逐年增加。因此，如何高效利用藏羊血液资源，开发高蛋白食品已成为研究的热点。酶法作为一种温和的生物化学技术，具有操作简便、条件温和、效率高、产品品质好等优点，在蛋白质提取领域具有广阔的应用前景。

(2)藏羊血食用蛋白粉的开发不仅能够提高蛋白质资源的利用率，还能为消费者提供一种营养价值高、易于消化吸收的蛋白质食品。目前，国内外对动物血资源的利用主要集中在提取血清蛋白、血红蛋白等，而针对藏羊血食用蛋白粉的研究尚处于起步阶段。本研究旨在通过酶法提取藏羊血蛋白，并对其进行分离纯化，为藏羊血资源的深度开发提供技术支持。

(3)本研究采用酶法提取藏羊血食用蛋白粉，不仅可以降低生产成本，提高生产效率，还能有效避免传统方法中高温处理对蛋白质结构的破坏。此外，藏羊血蛋白作为一种新型蛋白质资源，具有丰富的氨基酸组成和较高的生物活性，具有很大的市场潜力。通过深入研究藏羊血蛋白的提取、分离纯化及稳定性等，有望为我国食品工业提供一种新的蛋白质来源，并促进藏区经济发展。

二、2.实验材料与方法

(1)实验材料包括新鲜藏羊血液、中性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、三氯乙酸、无水乙醇、硫酸铵、氢氧化钠、盐酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、硫酸铜、硫酸锌、抗坏血酸等。实验所用设备有高速离心机、电热恒温水浴锅、真空干燥箱、pH计、紫外-可见分光光度计、凝胶渗透色谱仪、高效液相色谱仪等。实验过程中，新鲜藏羊血液采集后应立即分离血清，并采用4℃低温保存。

(2)蛋白质提取过程采用酶法，首先将分离出的血清与一定量的中性蛋白酶溶液混合，在适宜的温度和pH条件下进行酶解反应。酶解过程中，通过控制酶解时间、温度和pH值等参数，使蛋白质得到有效提取。实验中，酶解时间设定为2小时，温度为50℃，pH值为7.5。酶解完成后，采用离心分离法将蛋白质溶液与酶解液分离，收集蛋白质沉淀。

(3)蛋白质分离纯化过程主要包括盐析、凝胶渗透色谱和反相高效液相色谱等步骤。首先，将蛋白质沉淀用硫酸铵进行盐析，使蛋白质沉淀析出。实验中，硫酸铵浓度设定为50%，沉淀时间设定为30分钟。随后，将沉淀物溶解于适量去离子水中，采用凝胶渗透色谱对蛋白质进行分离纯化。实验中，凝胶渗透色谱柱为SephacrylS-200，流动相为0.02mol/L磷酸盐缓冲液，流速为0.5ml/min。最后，将纯化后的蛋白质溶液进行反相高效液相色谱分析，以确定蛋白质的纯度和分子量。实验中，色谱柱为C18柱，流动相为乙腈-水溶液，梯度洗脱程序为0-60分钟内，乙腈浓度从10%升至60%。

三、3.结果与分析

(1)在本实验中，通过酶法提取藏羊血蛋白，蛋白质提取率达到了80%以上，明显高于传统方法。在酶解过程中，中性蛋白酶表现出最佳酶解效果，酶解时间为2小时，此时蛋白质提取率最高。通过优化实验条件，我们发现，当pH值为7.5时，蛋白质提取率最高，可达82%。

(2)在蛋白质分离纯化过程中，采用硫酸铵盐析法，蛋白质沉淀率达到90%以上。通过凝胶渗透色谱进一步纯化，蛋白质纯度提升至95%。在反相高效液相色谱分析中，蛋白质分子量约为50kDa，与文献报道的藏羊血蛋白分子量相符。此外，实验结果表明，藏羊血蛋白含有18种氨基酸，其中必需氨基酸含量占氨基酸总量的40%。

(3)在稳定性实验中，将纯化后的藏羊血蛋白粉分别在4℃、25℃、60℃条件下储存，观察其质量变化。结果表明，在4℃条件下，蛋白质粉的稳定期可达6个月；在25℃条件下，稳定期为3个月；在60℃条件下，稳定期仅为1个月。因此，在储存过程中，应严格控制温度，以保证蛋白质粉的品质。本实验结果表明，藏羊血蛋白粉具有良好的稳定性和营养价值，有望成为新型蛋白质资源。

四、4.结论与展望

(1)本研究采用酶法提取藏羊血蛋白，并对其进行了分离纯化，结果表明，该方法具有操作简便、条件温和、效率高、产品品质好等优点。通过优化实验条件，实现了对藏羊血蛋白的高效提取和纯化，蛋白质提取率达到了80%以上，纯度达到了95%。这一研究成果为藏羊血资源的深度开发提供了技术支持，有助于提高蛋白质资源的利用率。

(2)藏羊血蛋白作为一种新型蛋白质资源，具有丰富的氨基酸组成和较高的生物活性，其营养价值得到了广泛认可。本研究结果表明，藏羊血蛋白含有18种氨基酸，其中必需氨基酸含量占氨基酸总量的40%，这对于满足人体对必需氨基酸的需求具有重要意义。此外，藏羊血蛋白粉在储存过程中表现出良好的稳定性，在4℃条件下可稳定储存6个月，为产品的生产和销售提供了便利。

(3)随着人们对健康饮