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酶处理技术在输血科的应用

1、酶处理技术简介

酶处理技术是抗体鉴定试验中非常重要的手段之一，在弱凝集或存在混合抗体无法判断抗体特异性时发挥至关重要作用。常见的蛋白水解酶有无花果酶、木瓜酶及菠萝酶，这些蛋白水解酶可以破坏红细胞表面的唾液酸，降低红细胞表面的负电荷，从而减少红细胞之间的排斥力，缩短红细胞之间的距离，使抗原抗体反应时更容易出现凝集（尤其是IgG抗体）。

2、酶技术的对抗原抗体反应的增强作用

蛋白水解酶可以修饰红细胞上的某些抗原，使这些抗原更好的暴露，从而增强这些血型系统的抗原性，促进了红细胞抗原抗体反应。蛋白水解酶可以增强反应的代表性血型系统有RH血型系统、Kidd血型系统、Lewis血型系统、I血型系统、P血型系统等。

3、酶技术的对抗原抗体反应的减弱作用

蛋白水解酶除了可以增强某些血型系统的抗原性外，还可以改变某些血型系统的抗原结构，破坏其抗原性，从而使这些抗原抗体不发生凝集反应。蛋白水解酶可以破坏其抗原性的代表性抗原有M、N、S、s、Fya、Fyb等。

4、酶技术的分类

酶试验分为两类：

1.一步酶法：优点：操作简单；缺点：敏感性较二步酶法差，干扰多。

2.二步酶法：优点：敏感性强，干扰少；缺点：操作相对复杂，费时。

5、酶技术操作步骤

（以微柱凝胶Coomb’s卡抗筛试验操作为例）

（一）一步酶法:

1.将commbs卡标记好Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，撕去铝箔。

2.向标记好Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ孔中加入对应的浓度1％的抗筛细胞50μl。

3.向标记好Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ孔中加入25μl的待检血清。

4.向标记好Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ孔中加入25μl酶溶液。

5.将coombs卡放入专用孵育器37℃孵育15min。

6.离心观察结果。

（二）二步酶法：

1.取1体积的抗筛细胞，生理盐水洗涤三次，最后一次弃去上清液，轻轻摇散沉积的抗筛细胞，加入1体积的酶液，混匀。

2.37℃孵育15min。

3.用大量的生理盐水洗涤酶处理过的红细胞3次，最后配置成1%浓度的抗筛细胞。

4.将Coomb’s卡上标记好Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，撕去铝箔；

5.向标记好Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ孔中加入对应的浓度1％的酶处理过的抗筛细胞50μl。

6.向标记好Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ孔中加入25μl的待检血清。

7.将Coomb’s卡放入专用孵育器37℃孵育15min。

8.离心观察结果。

6、注意事项

1.蛋白水解酶处理红细胞的时间不宜过长，否则可能会引起被处理细胞的自发凝集。

2.蛋白水解酶可以破坏某些抗原的抗原性，所以酶技术不能用来做常规的抗筛试验和交叉配血试验。

3.酶技术可以增强冷凝集素的反应，每个人都有不同程度的冷凝集，所以酶处理红细胞不建议在4℃下进行常规试验。

4.S、s抗原用上述三种蛋白水解酶处理存在不确定性（抗原性可被破坏亦可不被破坏），需要注意。

酶处理后图例

1.图例一：抗-E+抗-Jkb抗体酶处理前后及不同酶技术方法处理后抗筛结果对比，可以看出酶技术增强了RH血型系统和Kidd血型系统抗原抗体反应，二步酶处理后凝集强度大于一步酶。

2.图例二：抗-M抗体酶处理前后及不同酶技术方法处理后抗筛结果对比，可以看出酶可以破坏M抗原，但一步酶有额外反应影响抗筛结果，二步酶抗筛结果是完全阴性。

3.图例三：常规抗体鉴定检出抗-Fya抗体，应用二步酶法后再鉴定，发现血浆中还存在抗-c抗体，从图例中可以看出，酶破坏了Fya抗原，消除了抗-Fya抗体的反应，而增强了Rh血型系统抗原抗体的反应。

常规抗体鉴定检出抗-Fya抗体

二步酶法鉴定血浆中检出抗-c抗体