外泌体研究进展课程03外泌体的鉴定.pptx

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?第三课外泌体的鉴定《外泌体研究进展》课程解螺旋|知识金牌

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外泌体电镜检测01

知识金牌透射电镜原理解螺旋|陪伴医生科研成长

知识金牌负染色技术用重金属盐(如磷钨酸钠、醋酸铀等)对铺展在载网上的样品进行染色,使整个载网都铺上一层重金属盐,而有凸出颗粒的地方则没有染料沉积。在电镜观测时,重金属染色的区域是黑暗的,而未被染色的样品颗粒则透明光亮,这种染色方法称为负染技术。负染色是只染背景而不染样品,与光学显微镜样品的染色正好相反。解螺旋|陪伴医生科研成长Formvar-carbon载网3.05mmdiameter.

知识金牌透射电镜样品台顶端模式图解螺旋|陪伴医生科研成长CurrProtocCellBiol.2006Apr;Chapter3:Unit3.22.doi:10.1002/0471143030.cb0322s30.实物图

知识金牌外泌体电镜检测将exosome固定在载样铜网上重悬100,000×g离心的exosome沉淀到50-100μl2%多聚甲醛; 如果是富集的冰冻exosome,融化并与等量4%PFA混合注:2%PFA中的exosome可在4℃储存一周将5μlexosome悬液加到Formvar-carbon载样铜网上。也可将5到10μlexosome悬液滴加到封口膜上,将铜网Formvar膜面朝下放在悬液上;每份exosome样品准备2-3个铜网。将100μlPBS加到封口膜上,用镊子将铜网(Formvar膜面朝下)放在PBS液滴上清洗重要:在所有步骤中,都应保持Formvar膜面湿润,而另一面干燥.注:相同样品的铜网可在同一PBS液滴中清洗将铜网放在50μl1%戊二醛液滴上5min.将铜网放在100μlddH2O2min(洗8次)解螺旋|陪伴医生科研成长CurrProtocCellBiol.2006Apr;Chapter3:Unit3.22.doi:10.1002/0471143030.cb0322s30.

知识金牌外泌体负染色处理及电镜检测将铜网放在50μl草酸双氧铀液滴上pH7,5min将铜网放在50μl甲基纤维素液滴上10min,冰上操作铜网放到样品台顶端的不锈钢环上,在滤纸上吸去多余液体;空气中干燥5到10min将铜网装在样品盒子里,80kV下拍摄电镜照片.解螺旋|陪伴医生科研成长CurrProtocCellBiol.2006Apr;Chapter3:Unit3.22.doi:10.1002/0471143030.cb0322s30.

知识金牌外泌体电镜结果Electron-microscopicobservationofwhole-mountedexosomespurifiedfrommousedendriticcells.CurrProtocCellBiol.2006Apr;Chapter3:Unit3.22.doi:10.1002/0471143030.cb0322s30.茶托型解螺旋|陪伴医生科研成长一侧凹陷的半球形100nm

知识金牌外泌体电镜结果ElectronmicroscopyanalysisofExossecretedbyobeseadiposetissuemacrophagesCell.2017Oct5;171(2):372-384.e12.doi:10.1016/j.cell.2017.08.035.Epub2017Sep21.茶托型解螺旋|陪伴医生科研成长200nm

知识金牌外泌体电镜结果Nature.2017Jun22;546(7659):498-503.doi:10.1038/nature22341.Epub2017Jun7.解螺旋|陪伴医生科研成长茶托型100nm

知识金牌外泌体电镜结果Characterizationofneuron-derivedexosomesbytransmissionelectronmicroscopy(TEM)CellRes.2017Jul;27(7):882-897.doi:10.1038/cr.

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