流式细胞术原理及应用(新).pptVIP

**FITC异硫氰酸荧光素，激发波长488nm,发射波长525nmPE藻红蛋白，激发波长488nm,发射波长575nm**散射光信号：不依赖任何细胞样品的制备技术（如染色），检测细胞的物理参数或固有参数。前向角散射（FSC),与细胞的大小有关。常被作为阈值，来排除样品中各种碎片及鞘液中的小颗粒的干扰。侧向角散射（SSC），与激光束正交90°方向的散射光信号，侧向角散射光对细胞膜，胞质、核膜的折射率更为敏感，可提供有关细胞内精细结构和颗粒性质的信息。**荧光：自发荧光特异荧光荧光素发荧光的原理：荧光素受到一定波长（激发波长）的激光激发后，其原子核外电子由于吸收了激光能量，由原本处于基态轨道跃迁到激发轨道上运动，然后当电子由激发态重新回到基态时，释放出能量并发射出一定波长（发射波长）的荧光。**DNA含量检测是流式细胞仪应用最早，且目前广泛应用的指标之一。恶性肿瘤细胞一般多出现异倍体。研究证明DNA含量分析对人的肿瘤的诊断、预后评估有很高的价值。**在生物细胞中，DNA含量是恒定的参量，DNA含量随细胞增殖周期各时相不同而发生变化。DNA含量多少与荧光燃料结合量成正比；荧光强度与DNA分子结合的荧光素多少成正比。（三）流式细胞术的临床应用白血病免疫分型HLA-B27:强直性脊柱炎淋巴细胞亚群造血干细胞计数：造血干细胞移植网织红细胞PNH诊断（CD55、CD59）血小板活化试验第53页,共80页，星期六，2024年，5月流式细胞术与造血干细胞移植第54页,共80页，星期六，2024年，5月流式细胞术与白血病免疫分型第55页,共80页，星期六，2024年，5月流式细胞的免疫分型：是白血病分型的重要指标，而白血病分类是选择化疗方案和判断预后的重要依据。FAB标准(MICM)，形态学、免疫表型染色体、分子生物学结合,适合于白血病的分型诊断，但不适合用于确诊是不是白血病。Minimalresidualdiseases(MRD)第56页,共80页，星期六，2024年，5月微小残留病变的检出（MRD）：MRD是白血病复发的主要根源，FCM的高特异性和敏感性可以在患者缓解期检测是否有残留病变细胞，早期探测MRD，以免复发。第57页,共80页，星期六，2024年，5月有证据表明外周血淋巴细胞HLA-B27的表达及其表达程度与强直性脊髓炎的发生有很大相关性，利用流式细胞术进行HLA-B27检测，可同时排除交叉反应，是目前检测HLA-B27的最好方法。流式细胞术与强直性脊柱炎第58页,共80页，星期六，2024年，5月第59页,共80页，星期六，2024年，5月淋巴细胞亚群分析机体免疫状态是衡量机体是否罹患疾病的重要指标，目前多采用流式细胞术来检测机体的免疫状态，其中最重要的指标是检测T,B,NK淋巴细胞的水平。第60页,共80页，星期六，2024年，5月常用细胞表型及意义（clusterofdifferentiation,CD)CD3总T细胞CD4T辅助/诱导细胞亚群CD8T抑制/细胞毒细胞亚群CD19B细胞抗原CD16+56NK细胞CD33髓细胞前体CD34多能干细胞第61页,共80页，星期六，2024年，5月由于T淋巴细胞在人体的免系统中承担着重要功能，因此当感染发生时，T淋巴细胞各亚群的变化往往能很敏感地反应感染的状态和程度。例如：CD4分子有HIV识别部位，因CD4细胞是HIV病毒的受体，AIDS患者CD4+T细胞明显减少，该指标是诊断AIDS的重要指标。当病毒感染发生时（如乙型肝炎、EB病毒和巨细胞病毒包涵体病毒），CD8+T细胞增多，对CD8T细胞测定有助于对感染的诊断、治疗效果的动态观察。第62页,共80页，星期六，2024年，5月利用流式细胞仪可对器官移植和骨髓移植后的患者进行监控。当患者CD3+、CD25+持续增加提示已开始发生排异，CD4+/CD8+T持续下降，表明有感染发生，当其比值小于0.2时必需停用免疫抑制剂。流式细胞术与移植第63页,共80页，星期六，2024年，5月其它免疫性疾病分析SLE患者的淋巴细胞变化可以反应该病的活动情况和器官侵犯程度，活动或非活动性伴有多系统疾病，但无肾脏损害的患者可出现CD4+CD8+T比值升高，伴有严重肾脏损害的SL