抗体的制备 _原创精品文档.pdfVIP

单抗：

过程：

单克隆抗体技术(monoclonalantibodytechnique)：一种免疫学技术，将产生

抗体的单个B淋巴细胞同骨髓肿瘤细胞杂交，获得既能产生抗体，又能无限增

殖的杂种细胞，并以此生产抗体。是仅由一种类型的细胞制造出来的抗体，对应

于多克隆抗体、多株抗体——由多种类型的细胞制造出来的一种抗体。

制备过程：

1、免疫动物

免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程。一般选

用6-8周龄雌性BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。抗原通

过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、

增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。

(1)抗原制备。(2)免疫动物的选择。

(3)免疫程序的确定。

（免疫途径常用体内免疫法包括皮下注射、腹腔或静脉注射，也采用足垫、皮内、

滴鼻或点眼。最后一次加强免疫多采用腹腔或静脉注射，目前尤其推崇后者，因

为可使抗原对脾细胞作用更迅速而充分。在最后一次加强免疫后第3天取脾融

合为好，许多实验室的结果表明，初次免疫和再次免疫应答反应中，取脾细胞与

骨髓瘤细胞融合，特异性杂交瘤的形成高峰分别为第4天和第22天，在初次免

疫应答时获得的杂交瘤主要分泌IgM抗体，再次免疫应答时获得的杂交瘤主要分

泌IgG抗体。）

2、细胞融合

采用二氧化碳气体处死小鼠，无菌操作取出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细

胞悬液。将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并加入促

融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，

形成杂交瘤细胞。

3、选择性培养

选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞，一般采用HAT选择性培养基。在

HAT培养基中，未融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，

不能利用补救途径合成DNA而死亡。未融合的淋巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-

磷酸核糖转移酶，但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。只有融合的杂交

瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，并具有骨髓瘤细

胞能无限增殖的特性，因此能在HAT培养基中存活和增殖。

4、杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化

在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细

胞，因此，必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆

化培养。采用灵敏、快速、特异的免疫学方法，筛选出能产生所需单克隆抗体的

阳性杂交瘤细胞，并进行克隆扩增。经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球

蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后，及时进行冻

存。

5、单克隆抗体的大量制备

单克隆抗体的大量制备主要采用动物体内诱生法和体外培养法。

(1)体内诱生法取BALB/c小鼠，首先腹腔注射0.5ml液体石蜡或降植烷进行预

处理。1-2周后，腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖，并产

生和分泌单克隆抗体。约1-2周，可见小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可

获得大量单克隆抗体。

(2)体外培养法将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养。在培养过程中，杂交瘤细

胞产生并分泌单克隆抗体，收集培养上清液，离心去除细胞及其碎片，即可获得

所需要的单克隆抗体。但这种方法产生的抗体量有限。各种新型培养技术和装置

不断出现，大大提高了抗体的生产量。

特点：

一是特异性，针对特定的单一抗原表位，它具有高度的特异性，抗肿瘤抗体药物

的研究表明，其特异性主要表现为特异性结合、选择性杀伤靶细胞、体内靶向性

分布以及具有更强的疗效。

二是多样性，主要表现在靶抗原的多样性、抗体结构的多样性、作用机制的多样

性等方面。

三是定向性，抗体药物可以定向制造，就是根据需要制备具有不同治疗作用的抗

体药物。基于这些特点，我们可以用来制成“生物导弹”运送药物至病害部位，

主要是癌细胞，从而达到治疗效果。

类型：鼠源性单克隆抗体；人鼠嵌合抗体；人源化单克隆抗体

鼠源性单克隆抗体（杂交瘤单克隆抗体制备技术的基本原理是利用聚乙二醇作为

细胞融合剂，使免疫的小鼠脾细胞与具有不断繁殖能力的小鼠骨髓瘤细胞在体外

进行融合，在HAT选择性培养基的作用下，只让融合成功的杂交瘤细胞生长，经

过反复的免疫学检测筛选和单个细胞培养(克隆化)，最终获得既能产生所需单克

隆抗体，又能不断繁殖的杂交瘤细胞系，将这种细胞扩大培养，接种于小鼠腹腔，

在其产生的腹水中即可得到高效价的单克隆抗体。由于单抗的应用是从体外诊断

向体内肿瘤定位和治疗方向