人教版高考生物学一轮总复习精品课件 第十单元 现代生物科技专题 第31讲 基因工程.ppt

答案(1)逆转录酶(或反转录酶)(2)特异性核苷酸序列退火(或复性)(3)曾感染新冠病毒,已康复(或已接种新冠疫苗)已感染新冠病毒(4)人工合成法获取蛋白S基因→构建基因表达载体→导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定2.(2021湖南)M基因编码的M蛋白在动物A的肝细胞中特异性表达。现设计实验,将外源DNA片段F插入M基因的特定位置,再通过核移植、胚胎培养和胚胎移植等技术获得M基因失活的转基因克隆动物A,流程如图所示。回答下列问题。(1)在构建含有片段F的重组质粒过程中,切割质粒DNA的工具酶是,这类酶能将特定部位的两个核苷酸之间的断开。?(2)在无菌、无毒等适宜环境中进行动物A成纤维细胞的原代和传代培养时,需要定期更换培养液,目的是。?(3)与胚胎细胞核移植技术相比,体细胞核移植技术的成功率更低,原因是。从早期胚胎中分离获得的胚胎干细胞,在形态上表现为(答出两点即可),功能上具有。?(4)鉴定转基因动物:以免疫小鼠的淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行融合,筛选融合杂种细胞,制备M蛋白的单克隆抗体。简要写出利用此抗体确定克隆动物A中M基因是否失活的实验思路。。?答案(1)限制性核酸内切酶(限制酶)磷酸二酯键(2)清除代谢产物,防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害(3)动物胚胎细胞分化程度低,恢复其全能性相对容易,动物体细胞分化程度高,恢复其全能性十分困难细胞体积小、细胞核大、核仁明显(任选两点作答)发育的全能性(4)B取动物A和克隆动物A的肝组织细胞,分别提取蛋白质进行抗原—抗体杂交本课结束(1)为了促进土壤农杆菌吸收重组质粒,可用处理土壤农杆菌,使其处于以便吸收重组质粒。?(2)将重组质粒导入土壤农杆菌的目的是利用农杆菌能够的特点,使目的基因进入受体细胞中,并插入菊花细胞的上,最终形成转基因植株。?(3)将愈伤组织转移到添加一定浓度植物激素和的培养基中,在适宜条件下进行培养,筛选转基因菊花。?(4)可用方法检测转基因菊花是否含有目的基因,使用该方法时,需根据抗虫基因的核苷酸序列设计个特异性引物,以转基因菊花的DNA为模板进行第一轮扩增。?(5)将转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料以适当比例混合后饲喂菊天牛2龄幼虫,实验结果如下表所示。组别死亡率/%实验组转基因植株160.00转基因植株253.33对照组13.33①对照组应饲喂等量的。?②据表分析,差异显著,说明转基因菊花对菊天牛2龄幼虫有较强的毒杀作用。?答案(1)Ca2+(或CaCl2)感受态(2)感染菊花(或植物)细胞,并将T-DNA转移至受体细胞染色体DNA(3)卡那霉素(4)PCR2(5)①非转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料的混合物②实验组与对照组死亡率方法突破1.基因组文库与cDNA文库的比较2.如何筛选出含有目的基因的受体细胞(1)原理:将目的基因插入含有两种抗生素抗性基因的载体时,如果插入某种抗生素抗性基因内部,则会导致该抗生素抗性基因失活。如图,目的基因插入了四环素抗性基因内部,则四环素抗性基因失活。(2)被转化的细菌有三种:含环状目的基因的细菌、含重组质粒的细菌、含自身环化质粒的细菌。(3)筛选方法:将混合处理后的细菌先放在含氨苄青霉素的培养基上培养,能生长的是含重组质粒的细菌和含自身环化质粒的细菌,如图1、2、3、4、5菌落,再利用无菌的绒布影印到含有四环素的培养基上,如图能生长的菌落为2、3、4,则在含四环素培养基上不生长的即为含有目的基因的菌落,如图1、5菌落。最后,可在含氨苄青霉素的培养基上挑取1、5菌落进行培养。3.选择限制酶的两个依据(1)根据目的基因两端的限制酶切割位点确定限制酶的种类①应选择切割位点位于目的基因两端的限制酶,不能选择切割位点位于目的基因内部的限制酶,如图甲可选择PstⅠ,不能选择SmaⅠ。②为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接,也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒,如图甲也可选择用PstⅠ和EcoRⅠ两种限制酶(但要确保质粒上也有这两种酶的切割位点)。(2)根据质粒的特点确定限制酶的种类①切割质粒和目的基因的限制酶一致,以确保产生相同的黏性末端。②质粒上有标记基因等,所选限制酶尽量不要破坏这些结构,如图乙中选SmaⅠ会破坏标记基因。③如果所选