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规模猪场环境中蚊蝇携带主要病毒监测技术规范

1范围

本文件规定了对规模猪场环境中蚊蝇携带主要病毒进行监测的技术要求。

本文件适用于规模猪场环境中蚊蝇携带主要病毒的监测，其他猪场参照使用。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T16551猪瘟诊断技术

GB/T18641伪狂犬病诊断方法

GB/T18648非洲猪瘟诊断技术

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T21674猪圆环病毒聚合酶链反应试验方法

GB/T22333日本乙型脑炎病毒反转录聚合酶链反应试验方法

GB/T27517鉴别猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性与经典毒株复合RT-PCR方法NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

NY/T4137猪细小病毒病诊断技术

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

DEPC：焦碳酸二乙酯（Diethylpyrocarbonate）

5样本采集

5.1采样人员

采样人员应符合NY/T541中的规定。

5.2采样时间

蚊子样本5月～10月采集，苍蝇样本每年4月～10月采集。每年应至少监测1次，并根据猪场周边环境及疫情状况调整采样频率。

5.3采样地点

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根据猪场布局，在猪舍、饲料库、粪便堆积场、污水处理井等场所设置采样点，采样点数量应根据猪场规模确定。

5.4采样方法

5.4.1蚊子样本采用灯诱法采集。室外应选择远离干扰光源，背风场所作为诱蚊灯悬挂点，在离地1.5m处挂灯，日落后20min开灯，连续诱捕蚊子2h关灯。室内安装时不应靠近门和能开启的窗，应与照明光源靠近安装。

5.4.2苍蝇样本采用笼诱法采集。将捕蝇笼分别放置在诱捕地点，天凉时应放在较暖及背风地方，炎热天气应放在阴凉的地方。诱饵宜使用糖醋水、腐鱼等有强烈气味的饵料。

5.5样本选择

每个蚊子采样点应至少选取30只腹部饱满蚊子放入1个灭菌自封袋，每个苍蝇采样点应至少选取10只苍蝇放入1个灭菌自封袋，标记信息备用。剩余苍蝇、蚊子集中无害化处理。

5.6样本管理

5.6.1样本保存和运输

5.6.1.1采集的样本应采用保温容器加冰袋或干冰密封，应在8h之内运送到实验室。

5.6.1.2样本生物安全标识和运送流程应按照NY/T541确定的要求执行。

5.6.1.3样品到达实验室后，在2℃~8℃条件下保存应≤24h。若需长期保存，应放置于超低温冰箱(≤-70℃),避免反复冻融。

5.6.2样本信息记录

完整、准确填写采样信息登记表，并归档备查。

6病原监测

6.1生物安全措施

样本处理及检测操作的生物安全措施应符合GB19489中的要求。

6.2样本前处理

按每个采样点灭菌自封袋中蚊子、苍蝇样本分别合样制样，先在生理盐水中漂洗1次～2次，置于无菌研钵中，加入适量DEPC-H2O研磨匀浆，将匀浆液置于无菌离心管中，于4℃条件下12000r/min离心10min，取上清液备用。

6.3监测项目

重点开展非洲猪瘟、猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬病、猪圆环病毒病等病原监测，其它病种可根据猪场疫病状况和防控需要选择，如猪细小病毒感染、日本脑炎等。

6.4病原检测依据标准

病原检测依据标准见表1。

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表1病原检测依据标准

疫病名称

依据标准

非洲猪瘟

GB/T18648

猪瘟

GB/T16551

猪繁殖与呼吸综合征

GB/T27517

猪伪狂犬病

GB/T18641

猪圆环病毒病

GB/T21674

猪细小病毒感染

NY/T4137

日本脑炎

GB/T22333

6.5结果记录与分析

6.5.1样本检测完毕，应完整、准确记录检测结果备查。

6.5.2对于检测结果阳性的，宜进一步测定毒株关键基因序列，分析毒株基因遗传变异情况，为猪场采取疫病风险评估、免疫、消毒、无害化处理等针对性防控措施提供技术依据。

7样本留存

样本留存应符合GB19489中的要求。

8废弃物处置

废弃物处置应符合GB19489中的要求。