CCR5 siRNA对类风湿关节炎大鼠滑膜细胞增殖周期的影响 .pdfVIP

西南医科大学学报2022年第45卷第2期

112JournalofSouthwestMedicalUniversityVol.45No.22022

论著

CCR5siRNA对类风湿关节炎大鼠滑膜细胞

增殖周期的影响

121112

王友强，兰由玉，张为，姚娟，邹兴静，刘伟

1.西南医科大学附属中医医院检验科（泸州646000）；2.西南医科大学附属医院风湿免疫科（泸州646000）

【摘要】目的利用小干扰RNA（siRNA）抑制CC趋化因子受体5（CCR5）的表达，以探讨CCR5siRNA对类风湿关节炎（RA）大鼠滑膜

细胞增殖与细胞周期的影响及其可能机制。方法采用胶原诱导法构建RA大鼠模型，分离和培养RA大鼠滑膜细胞，通过Lipofectamine2000

将CCR5siRNA和NCsiRNA载体转染入细胞以判断其转染效率。并将体外培养的滑膜细胞分为4组：RA组（RA大鼠滑膜细胞）、RA+NC组

（加入脂质体包裹的NCsiRNA）、RA+mock组（加入脂质体）、RA+siRNA组（加入脂质体包裹的CCR5siRNA）。利用RNA干扰技术抑制RA

大鼠滑膜细胞CCR5的表达后，再用qRT-PCR和WesternBlot检测各组滑膜细胞CCR5、细胞周期相关基因（CyclinD1、CyclinE1、CyclinB1）

mRNA和蛋白表达情况；MTT检测各组滑膜细胞增殖情况；PI单染检测滑膜细胞细胞周期分布情况。结果与RA组比较，RA+siRNA组

CCR5mRNA表达水平（1.16±0.21）比（1.85±0.61）、CCR5蛋白水平（0.19±0.01）比（0.44±0.05）均明显降低（P0.05）；RA+siRNA组Cy⁃

clinD1、CyclinE1、CyclinB1mRNA水平（1.32±0.01）、（1.23±0.26）、（1.33±0.05）分别较RA组（1.52±0.06）、（1.68±0.08）、（1.94±0.07）显

著降低（P0.05）；RA+siRNA组CyclinD1、CyclinE1、CyclinB1蛋白水平（0.88±0.03）、（1.46±0.13）、（1.56±0.13）分别较RA组（1.38±

0.03）、（1.98±0.12）、（2.13±0.08）明显降低（P0.05）；与RA组比较，RA+siRNA组RA大鼠滑膜细胞G0/G1期比例（70.27±1.06）%较

（59.26±0.59）%上升（P0.05），S期比例（14.10±0.82）%较（23.94±1.71）%降低（P0.05），并且滑膜细胞生长明显受抑，而RA+mock、RA+

NC组无明显差别（P0.05）。结论CCR5基因沉默可抑制滑膜细胞的生长，使G0/G1期滑膜细胞比例增加，S期细胞比例减少，还可通过调节

细胞周期相关基因CyclinD1、CyclinE1、CyclinB1的表达来调节细胞周