DB34T 3284-2018 猪丹毒丝菌实时荧光PCR检测方法.pdfVIP

ICS11.220

B41

DB34

安徽省地方标准

DB34/T3284—2018

猪丹毒丝菌实时荧光PCR检测方法

Methodofthereal-timePCRforthedetectionofErysipelothrixrhusiopathiae

2018-12-29发布2019-01-29实施

安徽省市场监督管理局发布

DB34/T3284—2018

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由安徽农业大学提出。

本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：安徽农业大学、安徽浩翔农牧有限公司、安徽省动物卫生监督所、巢湖市畜牧兽

医局、阜阳市动物卫生监督所、合肥市动物疫病预防与控制中心、安徽省兽药饲料监察所，同济大学。

本标准主要起草人：李郁、李雪松、李春芬、张利亚、陈章、黄晓慧、孙裴、姚焱彬、张劲松、高

亚飞、孟天恺。

I

DB34/T3284—2018

猪丹毒丝菌实时荧光PCR检测方法

1范围

本标准规定了猪丹毒丝菌实时荧光PCR检测方法的缩略语、试剂和仪器、样品的采集、运输与保

存、操作方法。

本标准适用于猪组织样品、血样及其细菌培养物中猪丹毒丝菌的实时荧光PCR检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3缩略语

下列缩略语适用于本文件。

荧光PCR：荧光聚合酶链式反应

Ct值：每个反应管内的荧光信号量达到设定的阈值时所经历的循环圈数

DNA：脱氧核糖核酸

Taq酶：TaqDNA聚合酶

PBS：磷酸盐缓冲液

Eppendorf管：微量离心管

4试剂和仪器

4.1试剂

4.1.1无水乙醇:-20℃预冷。

4.1.275％乙醇:用新开启的无水乙醇和无DNA酶的灭菌双蒸水配制，-20℃预冷。

4.1.3灭菌双蒸水。

4.1.4动物组织基因组DNA提取试剂盒。

4.1.5引物：

——上游引物：5′-GTGGCGCATATAATCCCGTA-3′

——下游引物：5′-GCAAACGCAATGGCTTCT-3′

4.1.62×TransTaq-TPCRSuperMix。

4.1.7Taq酶。

4.1.8实验用水：应符合GB/T6682中一级水的规格。

4.2仪器

1

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4.2.1显微镜：物镜10倍～100倍。

4.2.2电子天平：感量0.1g。

4.2.3恒温培养箱：36℃±1℃

4.2.4冰箱：（2℃~8℃,-20℃,-80℃)。

4.2.5微量移液器：0.1µL～2.5µL、0.5µL～10µL、5µL～50µL、20µL～200µL、100µL～1000

µL。

4.2.6荧光PCR仪。

4.2.7恒温水浴锅（室温至100℃)。

4.2.8高速台式冷冻离心机：最大转速14000