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山药离体快繁技术规程

1范围

本文件规定了山药离体快速繁殖的培养基配制、外植体的获取、灭菌，无菌苗获取、扩繁和移栽等内容。

本文件适用于山药离体快速繁殖技术规程管理的全过程。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

NY-T2306花卉种苗组培快繁技术规程

DB15/T2594—2022紫花苜蓿组织培养技术规程

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

零余子Bubil

山药地上茎部叶腋间生有的肾形或卵圆形的珠芽，是一种气生变态茎。又称为山药籽。

3.2

腋芽Axillarybud

侧芽的一种，特指从叶腋所生出的定芽。

4培养基配制

4.1诱导培养基

零余子再生植株诱导培养基：具体成分为（1L）：MS培养基1.19g，蔗糖7.5g，琼脂粉7g。

茎段再生植株诱导培养基：具体成分为（1L）：MS培养基4.74g，蔗糖30g，NAA（萘乙酸）2.0mg，KT（激动素）0.5mg，琼脂粉7g。

4.2继代培养基

用于山药无菌苗的继代培养。具体成分为（1L）：MS培养基4.74g，蔗糖30g，NAA2.0mg，KT0.5mg，琼脂粉7g。

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4.3生根培养基

用于山药无菌苗的生根培养。具体成分为（1L）：MS培养基4.74g，蔗糖30g，NAA2.0mg，KT0.5mg，琼脂粉7g。

5外植体的获取

5.1零余子的获取

选取健壮、籽粒饱满、表皮无破损的山药零余子。

5.2茎段的获取

选择生长健壮、无损伤、无病虫害的山药植株，剪取幼嫩主枝或者侧枝带回实验室。

6灭菌

6.1灭菌前准备

制备无菌水，配制75%酒精，配制0.1%升汞（HgCl2）。

6.2培养基灭菌

培养基置于高压灭菌锅内，在1.1kg/cm2、121℃条件下，灭菌20min,待压力降至0时，尽快取出存放在接种室中指定位置备用。

6.3接种工具灭菌

将剪刀、镊子等接种工具包扎好置于高压灭菌锅内，参数设置同培养基灭菌，取出放置在超净工作台上。

6.4超净工作台灭菌

将灭菌的培养基和接种工具放置在超净工作台上，接通电源，打开超净工作台上的紫外灯灭菌25min~30min，先启动风机，再关闭紫外灯。接种前，工作台面用75%乙醇擦拭一遍。

6.5零余子消毒

零余子用流动水冲洗2h，去皮，在超净工作台上用75%乙醇浸泡30s，无菌水冲洗1次，0.1%的HgCl2浸泡10min，无菌蒸馏水冲洗7～10次，将零余子切成长、宽、高均为0.5cm的小块。

6.6茎段的消毒

幼嫩节间用流动水冲洗20min，在超净工作台上，剪去茎蔓叶片，取2cm～3cm带节茎段，消毒方法同零余子。

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7无菌苗获取

7.1零余子成苗

将表面消毒的零余子小块置于铺有诱导培养基中培养皿中。在温度25℃±2℃,光照强度2000Lx，光照时间16h/d进行诱导培养。6d左右，零余子小块组织周围出现少量的乳白色或黄绿色愈伤组织，18d左右，愈伤组织分化出根与芽；35d左右，形成再生植株。切下新芽接种到新的继代培养基上，约20d可得到健壮的无菌苗。

7.2茎段成苗

在组培室内培养，培养环境：温度25℃±2℃,光照强度2000Lx，光照时间16h/d。将茎段接种于再生植株诱导培养基中，培养30d～35d可得到健壮无菌苗。

8山药无菌苗扩繁

8.1继代培养

当诱导的丛生芽长到约2cm～2.5cm，在超净工作台中将丛生芽分切为单苗，接种于培养基中进行继代培养。培养环境：温度25℃±2℃,光照强度2000Lx，光照时间16h/d。

8.2生根培养

将继代培养生长健壮的无菌苗切成1cm～2cm单芽，接种到生根培养基中。培养环境：温度25℃±2℃,光照强度2000Lx，光照时间16h/d。20d～30d即可诱导出新生根。

9移栽

9.1炼苗

待植株根系生长健壮时，去掉封口膜，炼苗2d～3d。

9.2室内移栽

选择根系生长健壮的无菌苗，用自来水浸泡根部培养基12h，然后取出无菌苗洗净根部残留培养基，移栽到装有蛭石基质的上口直径10cm的苗钵中，罩上塑料薄膜，每日浇水，在温度25℃±2℃,光