生技大三下学期课件-植物组织培养(5).ppt

5.1胚培养成熟胚培养幼胚培养成熟胚培养较容易表面消毒培养基：含无机盐和糖，如White、Tukey、Randolph。光照：12h/d；温度：25～30℃。具有休眠习性的种子（苹果、桃等），接种后4℃预处理一段时间后再转入常温培养。幼胚培养的生长方式正常胚胎发育，维持胚性生长。早熟萌发：迅速萌发为幼苗，不能维持胚性生长。此幼苗畸形瘦弱，易死亡，应避免。胚胎发育过程异养期：球形期以前，需复杂培养基。自养期：心形期开始，可用简单培养基。异养期易夭折，可采用胚乳看护培养，提高成功率，1％到30％～40％。看护培养看护培养（nurseculture）Muir等1954年设计。影响幼胚培养的因素培养基：高K+、高Ca2+、低NH4+；高糖（8％～12％），调节渗透压，防止早熟萌发；添加氨基酸和维生素；保持添加的生长调节剂和内源激素的平衡；添加天然有机物。环境条件：一般黑暗或弱光。胚柄：胚柄的存在对幼胚的存活是关键，可用赤霉素代替。胚培养的应用克服远缘杂交不亲和性：幼胚培养。打破种子休眠，缩短育种周期：如兰、银杏、油棕、鸢尾等。提高种子萌发率：长期营养繁殖的植物，如芭蕉、芋。克服珠心胚的干扰：柑桔、芒果、仙人掌等多胚性植物的珠心组织会发生多个不定胚，影响合子胚的发育。种子生活力的快速测定。诱导胚状体及胚性愈伤组织，用于快繁（如山楂）。5.2胚乳培养胚乳培养是指将胚乳组织从母体上分离出来，通过离体培养，使其发育成完整植株的技术。胚乳

裸子植物的胚乳是单倍体（来源于雌配子）。除兰科、Podostemaceae和Trapaceae外，所有被子植物都有胚乳组织。被子植物的胚乳组织是三倍体（两个起源于雌性，一个来自雄性）。随着胚的生长，胚乳被消耗，或者在成熟种子中作为储藏组织而存在。Triticumgrain小麦胚乳培养培养成熟的胚乳时，果实要进行表面消毒，胚乳和胚在无菌条件下切出来。培养未成熟的胚乳时，整个果实要进行消毒，在无菌条件下，使用立体显微镜小心将胚乳组织切离。将胚乳从胚组织中分离出来是必须的，这一步骤的失败，将导致胚乳愈伤组织和胚起源（二倍体组织）的组织的污染。Plantletsarisingfrom

isolatedendospermtissue影响胚乳培养的因素培养基：MS、White、LS、MT等。有机物、生长调节剂。培养条件：温度一般25℃左右。胚：诱导成熟胚乳活化，可用赤霉素代替。取材时期：胚乳旺盛生长期较易诱导出愈伤组织。三倍体后代的特征种子败育：无子果实。营养体发达：粗壮、叶片厚大、叶色浓、花大或重瓣、果大而结实率低。染色体数有稳定型（核桃、檀香、橙、柚等）和畸变型（如苹果、枸杞、梨、玉米、大麦等）。应用

大量生产三倍体植株。为染色体工程提供不同染色体组合的植株。研究天然产物生物合成和代谢的实验系统。5.3胚珠和子房培养

5.3.1胚珠培养胚珠：种子植物的大孢子囊，是孕育雌配子的场所，是种子的前身。胚珠培养是将胚珠从母体分离出来，无菌条件下让其进一步生长发育，使其形成植株的技术。胚珠培养的类型受精胚珠培养未受精胚珠培养胚珠培养的意义防止杂种胚早期败育，但比幼胚培养容易。为试管受精提供一项基础技术。培养单倍体植株。培养胚珠的发育与母体胚珠发育相似胚珠脱分化为活跃的愈伤组织（胚囊、珠被）－－再生植株未受精胚珠－－单倍体胚珠培养的影响因素培养基：多用Nitsch。胎座和子房：有胎座和子房易培养。胚发育时期：球形胚后较易。5.3.2子房培养子房：雌蕊基部膨大部分，由子房壁、胎座、胚珠组成。子房培养是指将子房从母体上分离下来，无菌离体培养，使其发育成幼苗的技术。比胚珠培养更容易。5.4植物离体授粉植物离体授粉是指将未授粉的胚珠或子房从母体分离下来，进行无菌培养，并以一定的方式授以无菌花粉，使之在试管内实现受精的技术。又称离体受精或试管受精。目的：克服远源杂交的受精前障碍。离体授粉方式离体柱头授粉离体子房授粉离体胚珠授粉离体授粉成功的标志是授粉后能由胚珠或子房形成有生活力的种子。成功的例子十分有限。影响离体授粉受精的因素柱头和花柱：存在有利于受精。胎座：存在有利于受精。取材时期：最好在雌蕊授粉后和花粉管进入子房前。培养基：Ca2+能刺激花粉萌发和花粉管生长。培养条件：一般黑暗和弱光。复习思考题胚胎培养有哪些类型？各有什么应用？幼胚培养需要注意哪些问题？为什么要进行胚乳培养？什么是离体授粉？生长过旺：茎尖明显增大，基部产生愈伤组织，茎尖难于伸长，色泽较淡