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安徽医科大学学报ＡｃｔａＵｎｉｖｅｒｓｉｔａｔｉｓＭｅｄｉｃｉｎａｌｉｓＡｎｈｕｉ２００８Ａｕｇ；４３（４）。３５７・
基础医学研究
重组融合蛋白Ｔｕｍｓｔａｔｉｎ．ＴＮＦ．分泌型真核表达载体的构建
及其在中国仓鼠卵巢细胞中的表达
赵亮，－，姚丽娟，孔建新，濮跃晨，孙安源，罗以勤，张林杰
摘要目的构建重组融合蛋白Ｔｕｍｓｔａｔｉｎ—ＴＮＦ—Ｏｔ的分泌型和转移具有血管依赖性，应用抗血管生成方法治疗
真核表达载体并检测其在中国仓鼠卵巢细胞（ＣＨＯ—Ｋ１）中肿瘤已引起了广泛的关注与研究－】ｊ。肿瘤抑素
的稳定表达。方法以人胚肾２９３细胞为材料，提取总（ｔｕｍｓｔａｔｉｎ）是必威体育精装版发现的人基底膜来源胶原Ⅳ型肿
ＲＮＡ，用ＲＴ．ＰＣＲ方法合成人ｔｕｎｌｓｔａｔｉｎｃＤＮＡ，将该ｃＤＮＡ克瘤血管生成抑制因子，它抑制血管内皮细胞增殖并
隆到ｐＧＥＭ—Ｔ载体获得重组质粒ｐＧＥＭ—Ｔ／ｔｕｍｓｔａｔｉｎ。利用引起内皮细胞特异性凋亡Ｊ。ｔｕｍｓｔａｔｉｎ以非ＲＧＤ
ＰＣＲ从ｐＧＥＭ—Ｔ／ｔｕｍｓｔａｔｉｎ和ＰＢＶ２２０一ＴＮＦ—Ｏｔ载体中分别扩序列结合于整合素ＯｔＢ，受体并影响其活性，抑制肿
增出ｓｉｇ．ｔｕｍｓｔａｔｉｎ—ｌｉｎｋｅｒ和ｌｉｎｋｅｒ．ＴＮＦ片段，将其克隆得到
瘤血管内皮细胞的生长，使原发和转移瘤处于休眠
ｓｉｇ—ｔｕｍｓｔａｔｉｎ—ｌｉｎｋｅｒ—ＴＮＦ片段，ｓｉｇ—ｔｕｍｓｔａｔｉｎ—ｌｉｎｋｅｒ．ＴＮＦ片段经
状态，从而抑制肿瘤生长，被认为是最有前途的肿瘤
酶切后，插入经同样酶切ｐｌＲＥＳｎｅｏ３质粒，利用克隆ＰＣＲ、限
生长抑制剂之一。大量的动物试验表明肿瘤坏死因
制性内切酶消化以及序列测定对获得的ｓｉｇ—ｔｕｍｓｔａｔｉｎ—ｌｉｎｋｅｒ一
，Ｉ＇ＮＦ基因片段及重组载体进行验证。将重组ｓｉｇ—ｔｕｍｓｔａｔｉｎ—子（ＴＮＦ）具有强大的抗肿瘤活性Ｊ，它可触发肿瘤
微环境中肿瘤细胞和正常细胞造成相关血管的破坏
ｌｉｎｋｅｒ－ＴＮＦ真核表达载体转染到ＣＨＯ．Ｋ１对其表达状况进行
检测。结果所获得的ｓｉｇ—ｔｕｍｓｔａｔｉｎ—ｌｉｎｋｅｒ—ＴＮＦ片段（１．３２和损伤、激活炎症和免疫反应以及引起肿瘤细胞的
ｋｂ）序列与报道的序列完全一致。酶切鉴定的结果表明含肿凋亡和坏死Ｊ。但临床效果不理想，原因是毒副作
瘤抑素基因的重组ｐｌＲＥＳｎｅｏ３／ｓｉｇ—ｔｕｍｓｔａｔｉｎ・ｌｉｎｋｅｒ一，Ｉ＇ＮＦ表达用太大Ｊ。在介导肿瘤血管损伤方面，ＴＮＦ对内皮
载体构建成功。转染重组ｐｌＲＥＳｎｅｏ３／ｓｉｇ—ｔｕｍｓｔａｔｉｎ—ｌｉｎｋｅｒ—ＴＮＦ细胞有直接的细胞毒作用和造成内皮细胞凝血
的ＣＨＯ—Ｋ１表达了肿瘤抑素融合蛋白ｔｕｍｓｔａｔｉｎ・ｌｉｎｋｅｒ－ＴＮＦ。活性改变（抗凝转变为促凝）。在本研究中，我们选
从生长曲线结果来看，转染ｐｌＲＥＳｎｅｏ３／ｓｉｇ—ｔｕｍｓｔａｔｉｎ—ｌｉｎｋｅｒ—择运用ｔｕｍｓｔａｔｉｎ的血管靶向策略以增加ＴＮＦ对肿
ＴＮＦ真核表达载体和转染ｐｌＲＥＳｎｅｏ３的ＣＨＯ—Ｋ１比未转染
瘤血管内皮细胞的选择性。将人ｔｕｍｓｔａｔｉｎ和ＴＮＦ—Ｏｔ
的ＣＨＯ—Ｋ１细胞的生长速度要慢。结论成功地构建了重
（以下简写为ＴＮＦ）融合，并在融合蛋白前增加了信
组人肿瘤抑素融合蛋白的真核表达载体，并获得能稳定表达
号肽（ｓｉｇｎａｌｐｅｐｔｉ
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