输血相关传染病病原学标志物检测（临床输血检验课件）.pptx

临床输血检验技术

检测报告的签发

学习目标

熟悉检测结果的复核、报告发布、报告复核、报告审核签发的流程

检测报告的签发

核对完整实验过程和关键控制点

不一致，不在控

分析和查找原因

填写复核记录单

检测报告的签发

报告发布

《酶免试验血液检测过程报告》

核酸检测试验

其它

《核酸检测试验血液检测过程报告》

核酸免检放行标本

核酸试验组单项试验已发布的标本

机采预标本

常规试验不合格标本

发布总评结果

检测报告的签发

报告复核

填写报告复核记录

检测报告的签发

报告审核签发

《试验结果原始记录》

《血液检测过程报告》

《血液筛查检测报告》

填写报告最终签发记录

《报告复核记录》

检测标本的采集、运输、交接与处理

学习目标

掌握检测标本的采集、运输、交接与处理的基本原则

EDTA-K2真空抗凝管留取5ml血液样本

必须采用无菌、无DNA酶、无RNA酶、带分离胶的一次性真空EDTA-K2抗凝试管

标本采集

采集后4小时内进行离心，离心力要求为1200～1600g，时间不少于15分钟；标本离心后上下层界面清楚明显，上清液应透明清亮，呈淡黄色，无严重溶血，中层分离胶紧实均匀；离心后的标本上下分层界线清楚明显，标本量不得少于5ml。

采集的血液标本应尽快放入现场2～8℃冰箱内

标本运输

标本运输采用试管架等固定装置固定标本防止标本散落；标本应隔离密封包装，包装材料应满足防水、防破损、防外泄、易于消毒处理，装箱时应保持标本管口向上，具有一定保温效果。应避免运输途中发生剧烈震荡而导致样本破损、渗漏或溶血。有温控措施，保证整个冷链系统能有效控制温度在2～10℃范围。

标本交接

检查

运输过程温度是否在2～10℃范围

核查

标本来源、数量；核查标本管是否选用错误、有无破损，、渗漏、管内有无异物；

标本是否满足既定的质量要求，有无严重溶血、抗凝不充分、标本量不足或被稀释

核酸标本的预离心情况

标本与送检单信息对应性和完整性

无误后

签字确认

标本离心

核酸管应使用低温离心机

酶免管低温、常温离心均可

标本处理

离心后应检查标本有无溶血、样本管是否破损、血浆层有无异物。异常标本应交相关部门处理。

标本处理

编号

拔塞

摆架

检测后标本的保存

标本处理

临床输血检验技术

检测策略

临床输血检验技术

检测策略

学习目标

掌握输血相关传染病病原学标志物的检测策略

检测项目

检测项目

检测方法

（1）核酸扩增检测技术；

（2）血清学检测技术

（3）速率法（湿化学法）。

人类免疫缺陷病毒（HIV）感染标志物、乙型肝炎病毒（HBV）感染标志物、丙型肝炎病毒(HCV)感染标志物、梅毒螺旋体感染标志物等

检测策略

HIV、HBV、HCV

感染标志物检测

实施核酸检测

试剂批签发之前

2遍血清学检测和

1遍核酸检测，

应采用2个不同生产

厂家的试剂

实施核酸检测

试剂批签发之后

核酸和血清学检测2种

方法各进行1次检测

检测策略

梅毒螺旋体感染

标志物

采用2个不同生产厂家

的血清学检测试剂

进行检测

检测流程

检测流程

临床输血检验技术

检测报告的签发

学习目标

1、掌握HIV、HBV、HCV核酸检测的原理、实验有效性的判定、结论的判断。

2、知道反应性和非反应性标本保存的方法

病原学标志物的核酸检测原理

PCR扩增检测采用TaqMan荧光探针标定技术。人类免疫缺陷病毒、丙型肝炎病毒、乙型肝炎病毒核酸扩增分别采用不同荧光染料标记的探针，故可对提取的标本和内对照模板同时进行HBV（DNA）、HCV（RNA）、HIV1（RNA）检测。在反转录酶的作用下HCVRNA/HIV1RNA/内对照RNA反转录成cDNA，再与HBVDNA/内对照DNA一同作为模板在TaqDNA聚合酶的作用下扩增病毒核酸的保守区域和内对照特定区域。TaqDNA聚合酶5’—3’外切酶活性切割反应系统中带荧光标记的TaqMan探针产生荧光信号，随着PCR反应的进行，荧光信号不断积累。实时荧光定量PCR仪通过检测达到和超过荧光阈值的信号给出样品的阴阳性结果。

病原学标志物的核酸检测

样本

EDTA-K2真空采血管留取血液样本

器材与试剂

荧光定量PCR扩增仪、HIV、HBsAg、HCV病毒（DNA）核酸扩增荧光检测试剂盒等。

病原学标志物的核酸检测

分析项目

内对照

HBVDNA

HCVRNA

HIV-1RNA

备注

检测荧光

HEX

TAMRA

FAM

ROX

CY5

/

阴性对照

+

+

-

-

-

否则重测

阳性对照

/

/

+

+

+

否则重测

阳性对照、阴性对照、内对照结果判定规则

病原学标志物的核酸检测

分析项目

内对照

HBVDNA

HCVRNA

HIV-1RNA

结果判定

检测荧光

HEX

TAMRA

FAM

ROX

CY5

检测样本