形态学实验 实验十 生物材料石蜡包埋实验.pptxVIP

实验十生物材料石蜡包埋实验

（洗涤、脱水、透明、透蜡与包埋）;石蜡切片的主要步骤：

一、取材二、固定

三、洗涤四、脱水

五、透明六、透蜡与包埋

七、切片八、贴片

九、染色十、封藏

;一、实验原理：

1、洗涤

洗涤是洗去渗入细胞内部的固定液。因为材料中的固定液有的会妨碍染色；有的会发生沉淀或结晶；有的会继续与组织作用，使材料变坏等。因此要彻底洗净固定液。

;2、脱水:

材料经洗涤后含有大量的水分，必须用脱水剂脱尽里面的水分，有利于材料的透明和制片的保存。因为水分会使材料分解，而且透明剂与水是不相混合的，因此只有在完全无水的情况下，透明剂才能完全透入到组织当中。

;3、透明：是指利用透明剂既可与脱水剂相混合又能和石蜡相混合的性质，将脱水剂替换出来，使石蜡能顺利进入材料中，达到不同程度的透明状态。;4、透蜡：是指将材料中的透明剂逐步清除，以至完全由石蜡充分渗透。

5、包埋：是把被石蜡浸透的材料连同熔化的石蜡一起倒入一定形状的容器内，并立即让其冷却，使它凝固成含材料的蜡块，以备切片。

;常用的脱水剂：

酒精、丙酮、甘油、正丁醇、二氧乙环等。

常用的透明剂：

二甲苯、苯、甲苯、氯仿、香柏油等。透明剂都是石蜡的溶剂，绝大多数不能与水混合。

常用的包埋剂：石蜡（熔点42～60℃），分软蜡（熔点42～50℃）和硬蜡（熔点52～60℃），一般动物材料最常用52～56℃熔点的硬蜡。夏季采用高熔点的石蜡，冬季则采用低熔点的石蜡。

;二、实验步骤

1、洗涤

材料自固定液中取出，放入指形管或广口瓶，加入半管水，用纱布将管口扎住，置于水槽内，进行流水冲洗。注意水流不宜太急，以免冲坏材料。流水冲洗时间一般需要12～24小时。

;冲洗时应注意以下事项：

水溶性的固定剂：需用流水冲洗。

酒精溶剂的固定剂：应用同浓度的酒精浸洗。

含苦味酸的固定剂：（苦味酸与甲醛混合液除外），须用70％酒精浸洗，以免水洗后固定作用消失。;福尔马??固定剂：除长期存放外，一般可以不冲洗。

含有升汞固定剂：组织经固定后应在冲洗剂－水或酒精中加碘以洗去组织内汞的沉淀。

含有铬酸的固定剂：组织在冲洗时最好置于暗处，以免产生沉淀或使组织硬化而影响制片。

;2、脱水

材料自低浓度至高浓度的酒精进行脱水。一般经50%、70%、80%、95%直至纯酒精。每级停留约30分钟至1小时。如需过夜，应停留在70%酒精中。脱水必须彻底，否则不易透明，甚至使透明剂内出现白色混浊现象。

;脱水时的注意事项：

①脱水必须要在有瓶盖的器皿中进行，尤其是高浓度乙醇很容易吸收空气中的水份。

②组织由低浓度向高浓度的乙醇转移时，要用吸水纸吸干余液，以免将水份带入。

③在低浓度酒精中，每级停留时间不宜太长，否则易使组织变软，助长材料的解体。

④在高浓度或纯酒精中，每级停留时间不宜过长，否则会使组织变脆，影响切片。;3、透明

透明也是渐次由低浓度至高浓度进行，要求每级更换动作要迅速，盖好相应的盖子。材料先在纯酒精和二甲苯各半的混合液浸15～30分钟，再转入纯二甲苯中透明（至透明为止），一般15～30分钟。若透明过程中，材料周围出现白色雾状，说明材料中的水未被脱净，应退回纯酒精中重新脱水，然后再透明。总的透明时间不宜超过3h。

;4、透蜡

材料自二甲苯中取出后，先移入二甲苯和石蜡等量的混合液中约30分钟（透蜡格1），然后进入纯石蜡中约40～60分钟（透蜡格2），再换纯石蜡一次约40～60分钟（透蜡格3）。透蜡温度要恒定（放置60℃水浴锅中)，一般要求在52～56℃之间，以石蜡不凝固为好，并且要在最短的时间内完成，以免组织变硬、变脆、收缩等。;透蜡格:;5、包埋

从自动熔蜡机中取出石蜡模子(下图)注入适当的石蜡，再用温镊子取出透蜡格3中的组织样品，迅速转移到已注入石蜡的石蜡模子底部(中央)，放上包埋盒(预先在包埋盒侧面做好标记，文字面朝上)，再注入石蜡(不溢出包埋盒为宜)，转移石蜡模子到冰面上，待石蜡完全凝固（约30分钟）后取出包埋盒，备用。所有用过的石蜡模子都要放回熔蜡机中，以便再次使用。

;注意：包埋盒请标明学生姓名、组织样品名称，以免混淆或拿错。;普通包埋机;带冷台包埋机;包埋过程;具体操作步骤：;透明→50%纯