免疫学技术—免疫比浊分析(临床免疫检验课件).pptx

免疫比浊分析

免疫比浊分析是将液相内的沉淀反应与现代光学仪器和自动分析技术相结合的一项分析技术。该技术的出现使沉淀技术适应了现代检测快速、微量、自动化的要求，开创了免疫化学定量检测的新纪元前言

免疫比浊分析检测器光源透镜滤光片免疫比浊分析是应用抗原、抗体在液相中特异性反应形成免疫复合物，复合物微粒对光线的干扰可用仪器检测出来，以此对可溶性抗原进行定量

免疫比浊技术免疫胶乳比浊法散射免疫比浊法透射免疫比浊法速率散射比浊法终点散射比浊法方法类型

光路图

检测原理可溶性抗原、抗体在特定的电解质溶液中发生结合反应，形成小分子免疫复合物，在增浊剂的作用下迅速形成免疫复合物颗粒，使反应液出现浊度。在抗体稍微过量且固定的情况下，形成的免疫复合物量随抗原量的增加而增加，溶液的浊度也随之增加。待测抗原量与反应液的浊度呈正相关

透射免疫比浊法基本概念在抗原或抗体量一定的条件下，可以利用比浊仪在光源的光路方向上测定透射光强度与入射光强度的比值或吸光度，来判断待测抗原的量，这种方法称为透射免疫比浊法基本原理当一定波长的光通过抗原抗体反应形成的免疫复合物时会因为反射和吸收而减弱，一定范围内，透射光被吸收的量与复合物的量呈正相关关系，而复合物的量与抗原抗体量为一定的函数关系

多用于血清特定蛋白如IgG、IgM、IgA、C3C4、CRP等检测临床应用灵敏度是单向琼脂扩散方法的5～10倍，但与其他标记免疫分析技术相比还不够高。因此透射比浊类的自动分析仪用于免疫测定已趋减少该测定原理主要用于生化分析仪高亲和力的抗体，并保证抗体过量待测的抗原抗体复合物分子量足够大抗原抗体复合物数量足够多具有充分的反应时间不宜用于药物半抗原的检测方法评价透射免疫比浊法

散射免疫比浊法点击输入内容散射免疫比浊法是指一定波长的光沿水平轴照射，通过溶液时遇到其中的抗原抗体复合物光线被粒子颗粒折射而发生偏转，产生散射光。其中光线偏转的角度与发射光的波长和抗原抗体复合物的大小和多少密切相关。散射光的强度与复合物的含量成正比，即待测的抗原越多，形成的复合物越多，散射光就越强。分为终点散射免疫比浊法和速率散射比浊法单色器散射比浊计散射光θ

终点散射免疫比浊法点击输入内容实质是透射比浊法的改良，也称定时散射免疫比浊法选择在抗原抗体反应最佳时段，一般在30分钟内比浊，将检测误差降到最低可用自动化仪器测定但反应时间较长检测灵敏度在微克水平高于透射免疫比浊速率散射免疫比浊法点击输入内容ABCDFGHI抗原浓度递增散射光峰值该法是抗原抗体结合反应的一种动态测定方法。将抗原抗体的沉淀反应与散射比浊分析相结合，对单位时间内抗原和抗体结合形成复合物的速度进行动力学测定即为速率散射免疫比浊法抗原-抗体反应散射光峰值动态变化图

速率散射免疫比浊法其峰值出现的时间与抗体浓度及纯度直接相关需选用抗体纯度及亲和力较高的试剂。此外要保证待测样本血清的性状符合要求，如严重脂血等即为不合格样本技术要点该方法测定的是抗原-抗体反应的第一阶段检测时间短，速度快灵敏度高、特异性强检测范围宽，可自动化但存在钩状效应方法评价

免疫胶乳比浊法将抗体吸附在大小适中、均匀一致的胶乳颗粒上，制成致敏的胶乳颗粒，当遇到相应抗原时，发生交联反应，形成抗原抗体复合物，胶乳颗粒发生凝集

免疫胶乳比浊法单个胶乳颗粒在入射光波长之内并不阻碍光线透过，两个及其两个以上胶乳颗粒凝聚时则使透过的光减少，其减少的程度与胶乳颗粒凝聚的程度呈正比，即与待测抗原量呈正比，由此可检测样本中的特定抗原含量

免疫胶乳比浊法胶乳颗粒的均一性将直接影响光散射作用影响检测结果，因此需要选择均匀一致的胶乳颗粒试剂需要加保护剂以提高其稳定性所用器皿要洁净，避免杂质微粒的干扰该方法敏感度高，试剂稳定，个体免疫复合物对结果影响也小因此结果稳定、可靠特异性好，精确度高不需要特殊的仪器设备，一般分光光度计自动生化分析仪或散射比浊仪均可使用技术要点方法评价

临床应用尿微量蛋白免疫球蛋白补体血浆蛋白药物浓度测定IgGIgAIgMκ轻链λ轻链C3C4白蛋白前白蛋白转铁蛋白C反应蛋白地高辛卡马西平巴比妥茶碱等

010203免疫比浊分析的方法类型免疫比浊分析的临床应用小结免疫比浊分析的检测原理

思考题CBC1.免疫比浊分析的基本原理是什么？有哪些类型？2.速率散射免疫比浊法的基本原理和优点是什么?