体外培养的癌细胞的观察和传代培养.pptVIP

**********体外培养的癌细胞的观察和传代培养什么是癌细胞？“不死”的永生细胞癌细胞体外培养的意义？基础研究；药物筛选；单克隆抗体等方便；快捷和植物细胞相比动物细胞全能性表达较难动物：组织培养细胞培养动物细胞培养简介基本概念01培养的基本条件023培养细胞的形态特点03传代一般方法04实验内容介绍05原代培养：直接从供体取来的细胞，组织或器官进行的初次培养。通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。传代培养：原代培养物长成单层细胞达到一定密度时，营养消耗殆尽，需要分开扩大培养，补充营养，使之继续增殖。细胞系：可以传代培养的细胞即可成为细胞系。有限细胞系：正常二倍体。传代有限。无限细胞系：癌细胞，转化细胞。异倍体；无限传代。1基本概念转化细胞：病毒；癌基因；致癌物等

营养01胞外环境02无污染03其他04总原则：模拟体内条件。2培养的基本条件1氨基酸：12种必需氨基酸2葡萄糖3维生素：维持酶功能的稳定。4无机盐5血清：生长因子；粘附因子；解毒610—20%指示剂酚红2.1培养基—必要的营养小牛血清；胎牛血清；新生牛血清；进口血清01小牛血清02新生牛血清03胎牛血清04进口的胎牛血清血清的质量是细胞培养的关键1温度：哺乳类35—37度。2气体：95%空气，5%CO2。3CO2的作用。4PH:7.2—7.4。5NaHCO3Na++HCO3-+H2ONa++H2CO3+OH-2.2适宜的胞外条件01实验用品、培养基和试剂等的除菌消毒02操作环境的灭菌消毒03实验操作2.3无污染超净工作台logo风机紫外照射30分钟在酒精灯附近操作营养0101020304胞外环境无污染其他：平衡盐溶液的使用：PBS;D-Hanks等。020304总原则：模拟体内条件。2培养的基本条件3培养细胞的形态特点细胞的生长方式：

贴壁；半贴壁；悬浮形态类型：成纤维样；上皮样；悬浮；其他成纤维细胞Hela细胞淋巴细胞神经细胞细胞污染：贴壁细胞脱落，细胞“变瘦”，胞质颗粒多，培养基中杂质多，甚至可观察到菌；培养液很快变黄，且混浊。细胞缺乏营养：细胞致密时即应传代；若未及时传代，细胞“变瘦”，贴壁细胞变圆脱落，培养液发黄。健康细胞的标准：细胞形态饱满，折光性好，杂质少,伸展性好。**********