6第六章 碳水化合物的测定.ppt

2.2还原糖的测定——直接滴定法还原糖因子样品质量样品溶液总体积消耗样品溶液平均体积还原糖计算2.2还原糖的测定——直接滴定法试剂用量少，操作比较简便、快速，滴定终点明显适用于各类食品中还原糖的测定碱性酒石酸铜的氧化能力较强，醛糖和酮糖都可被氧化，所以测得的是总还原糖量；测定酱油、深色果汁等样品时，因色素干扰，滴定终点常常模糊不清，影响准确性。本法是GB方法。适用范围及特点2.2还原糖的测定——直接滴定法说明及注意事项次甲基蓝是如何实现终点的指示呢？次甲基蓝也是一种氧化剂，但在测定条件下氧化能力比Cu2+弱，故还原糖先与Cu2+反应，Cu2+完全反应后，稍过量的还原糖才与次甲基蓝指示剂反应，使之由蓝色变为无色，指示到达终点。碱性酒石酸铜甲液和乙液应分别贮存，用时才混合。为什么？酒石酸钾钠铜络合物长期在碱性条件下会慢慢分解析出Cu2O沉淀，铜离子有效浓度降低。2.2还原糖的测定——直接滴定法说明及注意事项碱性酒石酸铜乙液配制时需加入一定量的亚铁氰化钾。Why？使亚铁氰化钾与Cu+生成可溶性的无色络合物，而不再析出红色沉淀(氧化亚铜)，消除红色Cu2O沉淀对滴定终点观察的干扰。其反应如下：2.2还原糖的测定——直接滴定法说明及注意事项滴定时不能随意摇动锥形瓶，更不能把锥形瓶从热源上取下来滴定，而且滴定必须在沸腾条件下进行。为什么??加快还原糖与Cu2+的反应速度；次甲基蓝变色反应是可逆的，还原型次甲基蓝遇空气中氧时又会被氧化为氧化型，造成滴定终点不稳！氧化亚铜也极不稳定，易被空气中氧所氧化。保持操作稳定和反应液沸腾可防止空气进入，避免次甲基蓝和氧化亚铜被氧化而增加耗糖量。2.2还原糖的测定——直接滴定法说明及注意事项样品溶液必须进行预滴定why?本法对样品溶液中还原糖浓度有一定要求(0.1%左右)，测定时样品溶液的消耗体积应与标定时葡萄糖标准溶液消耗体积相近，通过预滴定可了解样品溶液浓度是否合适，浓度过大或过小应加以调整，使预滴定时消耗样液量在10mL左右；通过预测可知道样液大概消耗量，以便在正式测定时，预先加入比实际用量少1mL左右的样液，只留下1mL左右样液在后续滴定时加入，以保证在1分钟内完成续滴定工作，减少与空气接触的机会，提高测定的准确度。2.2还原糖的测定——直接滴定法说明及注意事项实验过程中有两次添加亚铁氰化钾：（1）配置碱性酒石酸铜标准溶液加入；（2）样品溶液前处理时加入。它们的作用有何不同??标准溶液中加入亚铁氰化钾是为了滴定时防止有色的氧化亚铜沉淀干扰终点判断；样品溶液前处理时加入是为了和醋酸锌反应形成沉淀，作为澄清剂，吸附除去溶液中的蛋白等杂质，避免干扰测定。2.2还原糖的测定——直接滴定法说明及注意事项本法能否用铜盐(如CuSO4+NaOH)作澄清剂对提取液进行预处理？为什么？本法是根据一定的碱性酒石酸铜溶液(Cu2+量一定)消耗量来计算样液中还原糖含量，反应体系中Cu2+的含量是定量的基础，所以在样品处理时，不能用铜盐作为澄清剂，以免样液中引入Cu2+得到错误的结果。2.2还原糖的测定——直接滴定法说明及注意事项醋酸铅等含铅的澄清剂能否用作本实验的样品前处理试剂？为什么？澄清剂不能用醋酸铅实验过程需加热沸腾，温度较高，易形成铅糖化合物，使消耗的还原糖量增加，测定结果偏低。2.2还原糖的测定——高锰酸钾法一定量的样品溶液与一定量过量的碱性酒石酸铜溶液反应→还原糖将二价铜还原为氧化亚铜→过滤??→氧化亚铜沉淀→加过量酸性硫酸铁溶液，目的是什么？→氧化溶解氧化亚铜沉淀→Fe3+被定量还原为Fe2+(还原性)→用高锰酸钾标准溶液氧化滴定所生成的Fe2+→根据高锰酸钾溶液消耗量可计算出氧化亚铜量→再从检索表中查出与氧化亚铜量相当的还原糖量→即可计算出样品中还原糖含量。各步反应式如下：2.2还原糖的测定——高锰酸钾法CuSO4+2NaOH=Cu(OH)2↓+Na2SO42.2还原糖的测定——高锰酸钾法由反应式可见，5molCu2O相当于2molKMnO4,故根据KMnO4标准溶液的消耗量可计算出Cu2O量。再由Cu2O量查检索表(附表,略)得出相应的还原糖量。2.2还原糖的测定——高锰酸钾法国家标准分析方法之一，适用于各类食品中还原糖的测定；优点:准确度高，重现性好（优于直接滴定法），有色样品溶液不受限制，为什么??生成的氧化亚铜沉淀被过滤出来，与原体系分离开来缺点：操作复杂、费时适用范围及特点2.2还原糖的测定——高锰酸钾法说明及注意事项取样量视样品含糖量而定，样品中含糖应在25-1000mg范围内，测定用样液含糖浓度应调整到0.