脂肪干细胞614课件.pptVIP

β-actin399bpMyoD243bpMyf5154bp上图是用5-氮杂胞苷诱导1周后的结果,由图可以看出,诱导一周后即可检测到成肌细胞分化早期表达基因Myf5和MyoD的表达。RT-PCR检测成肌标志基因的表达1为对照,2为Myf5(成肌调节因子),3为MyoD(生肌决定因子)成肌诱导肌细胞标志基因mRNA的表达成脂诱导后的形态学观察诱导48h(×100)诱导21d(×100)对照21d(×100)脂滴融合(×200)猪脂肪间充质干细胞经成脂诱导48h后,细胞胞浆内出现个别脂滴(图A),随着诱导时间的延长,充脂细胞数量增加(图B),且小脂滴逐渐融合成大脂滴(图C)。对照组细胞无充脂细胞出现（图C）。ACBD成脂诱导油红O染色B诱导后充脂细胞明显增多（×100）脂滴融合,胞核位于细胞一侧（×200）诱导后的脂肪细胞经油红O染色后,脂滴呈红色成脂诱导脂肪细胞标志基因表达B0260.00.20.40.60.8abcd14PPAR-γmRNA表达丰度诱导天数AMSCs成脂诱导后第2天可以检测到脂肪细胞标志基因PPARγ的表达,且随着诱导时间的增加,其表达水平也增加。PPARγ595bpβ-actin399bp成脂诱导由上述结果可以看出,猪脂肪间充质干细胞在地塞米松、胰岛素、吲哚美辛等的诱导作用下,细胞形态发生变化,由长梭形变为充满脂滴的脂肪细胞。油红O染色和RT-PCR均表明可以诱导分化脂肪细胞。成脂诱导研究表明,脂肪细胞由中胚层间充质干细胞发育而来,近30多年来对脂肪细胞的研究主要使用的是鼠源性前体脂肪细胞系和原代前体脂肪细胞。但是这两者都是已经定向的单能细胞,只能分化为成熟的脂肪细胞,因此这两个体外培养体系的研究只能局限于前体脂肪分化为成熟脂肪细胞这一阶段的细胞和分子事件。猪AMSC细胞系建立的初步研究因此,AMSCs细胞系的建立可为研究脂肪细胞分化全过程,探讨脂肪细胞分化早期细胞与分子事件提供新的研究模型。本实验室在成功分离猪原代AMSC细胞后,细胞单克隆扩增方法获得单一来源的AMSC细胞,传20代后细胞形态一致,经鉴定仍然具有AMSC表面标志。动物科技学院脂肪间充质干细胞杨公社Adipose-derivedMesenchymalStemCells汇报提纲研究背景脂肪干细胞优点及表面标记多向分化潜能猪脂肪干细胞分离培养、诱导分化及其建系应用前景及待解决的问题一、研究背景动物体内,脂肪组织不仅是重要的能量贮存库和赋形组织,还是保持内环境稳定及具有分泌激素和细胞因子的重要部位。脂肪细胞增殖与分化失常是导致肥胖及Ⅱ型糖尿病的重要因素。因此,脂肪细胞分化的研究一直是国内外医学及生物学领域的研究热点之一。干细胞包括胚胎干细胞和成体干细胞。目前的成体干细胞主要是骨髓来源的间充质干细胞。胚胎干细胞因道德伦理问题限制了其应用。骨髓来源的间充质干细胞是一类具有多向分化潜能的细胞,但骨髓穿刺给病人带来的痛苦大,且只能得到少量细胞(大约1个间充质干细胞/105基质支持细胞),因而存在取材困难、病人不易接受的缺点。因此,国内外研究人员积极寻找可替代的干细胞来源。背景知识2001年Zuk等首次从病人脂肪组织悬液中分离获得了有多向分化能力的细胞,并将其命名为抽脂处理细胞（PLA）。PLA在特异性诱导剂下可分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞和成肌细胞。之后,多个研究小组相继证实,脂肪组织中确实存在着与骨髓间充质干细胞相似的成体干细胞。脂肪间充质干细胞的发现进一步拓宽了脂肪组织领域的研究。背景知识二、脂肪源间充质干细胞的优点首先,从人类医学角度说,获取脂肪间充质干细胞比骨髓源性干细胞容易的多。皮下脂肪切除术是一种普通的外科手术,其安全性高、对患者带来的痛苦小。即AMSCs具有易获得性、安全、可迅速扩增及多向分化能力等特点,其将成为具有广阔治疗应用前景的一类成体干细胞。关于脂肪间充质干细胞标志，目前尚无统一标准。一般认为，脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干细胞均表达CD44、CD105.STRO-1、CD166及CD117。其中CD117是一种干细胞因子受体，在全能或多能干细胞中表达，包括胚胎干细胞。