DB51∕T 2404-2017 大熊猫种群遗传档案建立技术规程.docxVIP

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DB51

四川省地方标准DB51/T2404—2017

大熊猫种群遗传档案建立技术规程

2017-09-19发布2017-10-01实施

四川省质量技术监督局发布

I

DB51/T2404—2017

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4遗传标记选用原则 1

5实验流程 2

6线粒体标记PCR方法 2

7大熊猫性别鉴定的方法 3

8微卫星标记使用方法 4

9遗传档案数据的管理和使用 5

附录A（规范性附录）大熊猫微卫星标记编号、名称、来源及PCR扩增引物 6

II

DB51/T2404—2017

前言

本标准根据:GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的规定编写。本标准由四川省林业厅提出并归口。

本标准由四川省质量技术监督局批准。

本标准起草单位：四川省野生动植物资源保护管理站。

本标准主要起草人：岳碧松、魏辅文、张和民、沈富军、杨旭煜、古晓东。

1

DB51/T2404—2017

大熊猫种群遗传档案建立技术规程

1范围

本标准规定了建立圈养大熊猫和野生大熊猫遗传档案的技术规程。本标准适用于四川省圈养大熊猫和野生大熊猫遗传档案建立。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

DB51/T2288-2016野生大熊猫种群动态监测技术规程

3术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。3.1

微卫星序列microsatellitesequence

是指基因组中由1-6个核苷酸为基本重复单元组成的DNA串联重复序列，例如（AC）n、（ACG）n、（ATTT）n等，也称为短串联重复序列（Shorttandemrepeats，STR）或简单重复序列（Simplesequencesrepeats，SSR）。在个体间重复次数发生变化的多态性微卫星位点，可以作为微卫星标记使用。

3.2

DNA样品DNAsamples

是指利用大熊猫组织（如毛发、血液、精液、肌肉组织等）或新鲜粪便提取的大熊猫基因组DNA。

4遗传标记选用原则

4.1线粒体标记

大熊猫线粒体控制区PCR扩增引物(Zhangetal.2007):P-tp(5’-CTCCCTAAGACTCAAGGAAG-3’)

BEDH(5’-GGGTGATCTATAGTGTTATGTCC-3’)PCR扩增产物长度为750bp左右。

4.2性别鉴定分子标记

优先使用大熊猫锌指蛋白基因（ZF）PCR扩增引物（Xuetal.,2009）：GTf,5’-CAAGGATTTCCATGTAGCAGT-3’；

GTr,5’-ACTCTCCACAATGTCTACGGT-3’

2

DB51/T2404—2017

如果用上述引物对某些样品扩增困难，可采用以下2对引物进行组合扩增（Zhanetal.,2006;詹祥江,2006）:

扩增Y染色体SRY基因的ZX1引物，产物片段大小210bp：

ZX1-F：5’-CTACATAGCCCCAACCCCTTTTC-3’ZX1-R：5’-GGTTCTGGCCGCTGTCTCTACTAT-3’

扩增X染色体ZFX基因的引物，产物片段大小130bp，用于区分扩增失败与鉴定为雌性的情况：ZFX-F：5’-ATAATCACATGGAGAGCCACAAGCT-3’

ZFX-R：5’-CTCCTTTTTCCTTATGCACC-3’

4.3微卫星标记

在进行圈养大熊猫和野生大熊猫微卫星相关工作时（包括个体识别、亲子鉴定、种群遗传管理、种群监测、种群遗传多样性评估、种群遗传档案等），统一推荐使用30个微卫星标记（附录A），其中1-15号为基本标记，16-30号为备选标记，可根据工作目标选用合适数量的微卫星标记。只有当基本标记不够用时，才使用备选标记。

5实验流程

5.1线粒体标记扩增

使用4.1规定的线粒体标记引物对每个DNA样品进行PCR扩增，各取PCR产物2-5μL，用浓度为1.5%的琼脂糖凝胶电泳来检测是否扩增成功，只有当PCR扩增成功的样品才进入后续