紫外分光光度计 (2).ppt

二、定量分析

1.定量分析的依据

在吸收曲线上，某一吸收峰的高度与物质的浓度成正比。选择在λmax处:A大,信号大,灵敏度高.定量用公式：A=lgI0/It=-lgT=εbc=abc′=bc″式中c：（物质的量浓度），ε：摩尔吸光系数；c′：（质量浓度），a：吸光系数c″：百分比(g%ml),：比吸光系数（百分吸光系数）b：有效光程单位cm,粗略认为等于液层厚度。A=εbcε：是吸光物质在特定波长和溶剂的情况下的一个特征常数。数值上等于1mol·L-1吸光物质在1cm光程中的吸光度。(A=εbc)是吸光物质吸光能力的量度,它可做为定性鉴定的参数。也可用于估量定量方法的灵敏度：ε值→大，方法的灵敏度愈高。ε→大A→大ε由分子性质决定。在其他条件相同时，同种分子ε相同。ε是λ的函数,与被测物质c无关。ε:①与被测物质浓度无关②入射光波长λ③溶剂种类④吸光物质种类有关c(1mol·L-1)对应ε表示，是摩尔吸光系数。ε的大小可以表示吸收的强弱：ε＜102弱吸收102＜ε＜103较弱吸收103＜ε＜104较强吸收104＜ε强吸收朗伯-比尔定律的物理意义为：当一束平行单色光通过单一均匀的，非散射的吸光物质溶液时，溶液的吸光度与溶液浓度和液层厚度的乘积成正比。此定律不仅适用于溶液，也适用于其他均匀非散射的吸光物质（气体或固体），是各类吸光光度法定量分析的依据。吸光度A具有加和性A=A1+A2+……An=ΣAi=Σεibci在多组分体系中，如果各种吸光物质之间没有相互作用，这时体系的总吸光度等于各组分吸光度之和，即吸光度具有加和性。这个性质对于理解吸光光度法的实验操作和应用都有着极其重要的意义。利用参比溶液调100%透光率就是根据吸光度加和性原理。2.定量分析方法首先选择最佳单色光吸收波长作为入射光。（1）单一物质的定量测定。（2）混合物的定量测定。（1）单组分测定①标准曲线法（校正曲线法）a.绘制吸收曲线b.找出最大吸收波长（测定波长）c.用标准样品制作标准曲线d.测定未知样品，在标准曲线上确定其浓度。(2)直接比较法（对照法）a.配制已知浓度的标准溶液Cs，测定其吸光度As；b.相同条件下测样品溶液Ax二、差示法首先考察吸光度A的测量误差与浓度C的测量误差之间的关系。若在测量吸光度A时产生了一个微小的绝对误差dA，则测A的相对误差。由Lennbert-Beer定律：A=κbcdA=κbdc这是dc就是测量浓度c的微小的绝对误差。二式相除。0.434+lgT=0–lgT=0.434=A所以，当A=0.434时测定结果误差最小对应T=0.368T%为15-65间或A=0.2-0.8间读数误差对测定结果影响较小，均为0.03（即为3%）。①调整浓度c②改变液层厚度使读数A在0.2-0.8间③差示法差示法

适用于待测定浓度过高或过低，即吸光度值过大或过小时，组分的测定。高浓度示差法采用比待测试液浓度稍低的标准溶液作参比溶液，然后测定待测溶液的吸光度，再计算其浓度。下面以高吸光度法为例加以说明：标准溶液（cs）,Ts,As=εbcs样品溶液（cx）,Tx,Ax=εbcx（cscx）上式表明在符合比耳定律的浓度范围内，示差法测得的相对吸光度Ax’与被测溶液和参比溶液的浓度差Δc=cx-cs成正比，如果用上述浓度为cs的标准溶液作参比，测得一系列Δc已知的标准溶液的相对吸光度Ax’。绘制Ax’-Δc工作曲线，则由测得的试液的相对吸光度Ax’，即可从工作曲线上查得Δc，再根据公式Δc=cx-cs，这样cx=cs+Δc计算试样浓度。