蜱种鉴定技术规范.docxVIP

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常见蜱种鉴定技术规范

1范围

本文件规定了常见的5种蜱，即长角血蜱（Haemaphysalislongicornis）、嗜群血蜱（(Haemaphysalis

concinna）、日本血蜱（Haemaphysalisjaponica）、森林革蜱（Dermacentorsilvarum）、全沟硬蜱（Ixodespersulcatus）的采集、保存、形态学鉴定以及DNA条形码鉴定技术。本文件适用于蜱的种类鉴定，可辅助应用于相关蜱传病的监测与防控。其中形态学鉴定最适用于形态完整且未饱血的成蜱；DNA条形码技术适用于任何形态及不同发育阶段的蜱，包括残损蜱、饱血蜱、幼蜱、若蜱、成蜱、蜱卵。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T36788-2018，病媒生物密度监测方法—蜱类，2019

SN/T5337—2021，动物疫病传播媒介蜱种类鉴定技术规范，2022

3术语和定义

环境游离蜱：在经常放牧的草地、野生动物巢穴及家养畜舍地面采集到的蜱。

灭菌双蒸水：经过一次蒸馏后的水，再次蒸馏，并在103.4kPa，121℃的条件下高压蒸汽灭菌20min，得到灭菌双蒸水。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

COI:细胞色素C氧化酶亚基I（CytochromeCoxidasesubunitI）DNA:脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleicacid）

dNTP:脱氧核糖核苷三磷酸（Deoxy-ribonucleosidetriphosphate）PCR:聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）

SDS:十二烷基硫酸钠（Sodiumdodecylsulfate）

5样品采集

5.1试剂与材料

5.1.1镊子。

5.1.2白绒布

5.1.375%和95%乙醇。

5.1.4乳胶手套。

5.1.515mL和50mL离心管。

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5.2采集方法

5.2.1采集人员防护要求

穿浅色、表面光滑的长袖防护服，扎紧袖口和裤腿，穿雨靴，戴乳胶手套。

裸露皮肤涂抹趋避剂如避蚊胺等。

用杀虫剂浸泡帐篷等露营装备。

避免在蜱栖息地如草地、树林等环境中长时间坐卧。

野外活动结束后检查衣物上是否有蜱。采集人员需及时进行冲淋洗浴，并检查体表，重点排查头发、腋窝、腹股沟及阴部等位置是否有蜱叮咬或爬动。一旦发现蜱叮咬，用镊子从叮咬处夹住蜱，顺着叮咬方向小心取出，用碘伏或酒精反复擦洗伤口；如蜱的假头基留在皮肤内，用洁净的针头挑破伤口皮肤，挑出假头基，再用碘伏或酒精反复擦洗。保留蜱，置于离心管或其他密闭容器内4℃暂放，特别是在蜱传病流行的地区，需尽快就医。

5.2.2畜禽体上蜱的采集

在牛、羊、犬、禽等动物身上采集蜱时，用干净、尖细的镊子靠近皮肤表面缓慢夹取蜱，避免蜱的假头基部分残留在皮肤内。将采集到的蜱放置到15mL或50mL离心管中。去除蜱后，用75%乙醇溶液对被蜱叮咬处进行消毒。

5.2.3环境游离蜱的采集

布旗采集法：白绒布一边穿入木棍，在木棍两端系以长绳，选择在人和动物经常活动的小路周边草地上或灌木丛中缓慢拖动，草地以及灌木上的蜱即可附着在旗面上。每行走约5米左右，即停下检查旗背面是否有蜱附着，并用镊子收集于离心管中

直接采集法：在稍矮的草地，将身体稍下蹲贴近地面，轻轻扶起草叶，观察草叶背面是否有蜱；在稍高的草地，直接观察草尖处。发现蜱后用镊子收集于离心管中或将叶子截断连同蜱共同置入离心管内，尽快赴实验室内进行处置。

5.2.4衣物及布旗的处理

无需重复使用的物品，采用焚烧、煮沸或高温蒸汽的方法处理；需要重复使用的物品，如个人衣物、布旗等，采用煮沸法、高温蒸汽法或洗衣机的高温烘干功能进行处理。

5.3蜱样本的运输及保存

5.3.1运输

在车辆运输过程中需置于4-8℃车载冰箱。

5.3.2保存

用于蜱种鉴定的蜱样本置于离心管内，并加入足量的95%的乙醇溶液或无水乙醇浸泡，定期补充乙醇。容器上需附有采集标签，注明采集地点、日期、宿主、生境、海拔、经纬度、采集人等信息，避光阴凉处暂放，避免高温与阳光直射。

暂时保存需将完整的蜱置于4℃、适当湿度、避光环境下，可暂存2周以上。长期保存则需液氮冷冻1小时以上之后转入-80℃超低温冰箱保存。

6形态学鉴定

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6.1试剂与材料

参照SN/T5337—2021动物疫病