《GBT 38485-2021微生物痕量基因残留测定 微滴数字PCR法》必威体育精装版解读.pptx

《GB/T38485-2021微生物痕量基因残留测定微滴数字PCR法》必威体育精装版解读;目录;目录;目录;目录;目录;目录;PART;范围;;对样品进行提取、纯化等处理，获得DNA或RNA模板。;;PART;微滴数字PCR技术能够检测单个DNA分子的存在，灵敏度极高，可以有效避免漏检。;缩短检测时间;样品处理简便;;PART;;生产工艺控制;PART;主要负责标准制定中的技术研究和验证工作。;技术专家;PART;;;PART;;标准化操作;PART;;;数字PCR原理;微生物快速检测;PART;;微滴化处理的关键技术;反应条件;PART;荧光探针应与目标基因序列特异性结合，避免非特异性扩增导致的假阳性结果。;荧光探针的使用方法;荧光探针具有高特异性、高灵敏度、操作简便、污染风险低等优点，广泛应用于微生物痕量基因残留检测领域。;PART;;微滴数字PCR法优点;PART;适用范围;;PART;将样品分割成大量微小反应单元，每个单元进行独立的PCR扩增，以提高检测灵敏度。;样品处理;模板质量;PART;;SN/T2772;PART;;为确保检测结果的可比性和准确性，对术语进行了标准化定义。;PART;在生物体内或环境中以极其微量形式存在的基因片段，其浓度远低于正常基因组的含量。;生产过程中由于生物体之间的接触、感染或基因突变等原因导致的基因残留。;;PART;实验用水规格;通过离子交换树脂去除水中的离子和有机物，达到实验用水的规格要求。;实验用水试验方法;PART;应选择知名品牌、经过认证的试剂盒，以确保提取的质量和纯度。;样品处理;PART;;微滴生成器;用于检测每个微滴中是否含有荧光信号，从而判断模板DNA的存在与否。;微滴数字PCR反应试剂盒的构成;PART;;引物设计;;PART;;特异性

探针应与目标酿酒酵母的DNA序列特异性结合，确保与目标DNA的杂交效率高于与非目标DNA的杂交效率。

荧光标记

探针的一端应标记有荧光基团，以便在PCR扩增过程中实时监测荧光信号的变化，从而判断目标DNA的存在与否。

淬灭基团

探针的另一端应连接淬灭基团，当探针与模板DNA结合时，荧光基团与淬灭基团之间发生能量转移，导致荧光信号淬灭。当PCR扩增过程中，Taq酶的外切活性将探针切断后，荧光基团与淬灭基团分离，荧光信号恢复，从而实现对目标DNA的定量检测。;;PART;极限检测;;;微滴数??PCR仪的操作过程相对简单，对实验人员的技术要求较低。;PART;;;操作简便

自动化程度高，操作人员只需将样本放入仪器中，即可自动完成检测过程。;缺点：;PART;降低检测成本;样本DNA被分配到大量的微小液滴中，每个液滴中都含有一个独特的PCR反应体系。;热循环仪的其他优势;;PART;微生物痕量基因残留测定中的重要性;;;重复性;定期对电子天平进行校准，确保其精度和准确性。;PART;;移液器的操作规范;PART;;;PART;pH值的准确测量对于微生物痕量基因残留测定至关重要，因为酸碱度可能影响PCR反应的效率和准确性。;;PART;由于DNA和RNA在紫外光区域有吸收峰，紫外波长可用于检测微生物痕量基因残留。;特定物质吸收峰;PART;引物与探针;提取DNA;;数据分析;PART;;;;PART;选择高纯度、高浓度的基因组DNA作为阳性对照模板，确保扩增效率。;通过初步实验确定阳性对照DNA模板的初始浓度，以保证扩增反应在适宜范围内进行。;阴性对照;PART;样本来源;阴性对照的实验意义;PART;实验目的;;;微滴数字PCR法检测结果;PART;阳性对照结果分析;阴性对照的意义;PART;;;;PART;;;检测结果的分析与判定;PART;;扩增结果处理;PART;极限检测;数字化结果;PART;;提取方法的改进;去除抑制剂;;PART;;扩增效率;重复性与稳定性;定量能力;PART;;耐药基因检测;数字PCR技术在实际应用中需要解决微滴生成、分配、扩增等过程中的技术问题，以保证检测结果的准确性和可靠性。;PART;微量反应;;;;PART;微滴数字PCR法的优势;病毒载量的高低可以反映感染病毒的多少，对于评估病情和制定治疗方案具有重要参考价值。;;PART;利用特定的磁珠与DNA/RNA结合，通过磁场分离出目标核酸。;引物设计;原理介绍;PART;;早期感染检测;PART;ddPCR技术可以高灵敏度地检测目标序列，减少假阴性和假阳性结果。;;;PART;;;样品处理;PART;提升微生物检测准确性;通过单细胞转录组学技术，可以对微生物群落中的不同种类微生物进行识别和分类，并解析它们之间的相互作用关系。;样本制备;PART;推动科学研究;;《GB/T38485-2021微生物痕量基因残留测定微滴数字PCR法》的解读;PART