第3章-蛋白质完整版.ppt

吸附固体吸附能力不同分配液体分配系数不同离子交换离子交换剂亲和性不同凝胶多孔凝胶，通过速度不同亲和固定相只能与一种组分结合，——分开其它无亲和力的组分按层析原理分：固定相各组分对固定相第64页/共69页1.滤纸层析法滤纸层析是以滤纸作为惰性支持物的分配层析(它也并存着吸附和离子交换作用)，滤纸纤维上羟基具有亲水性，因此吸附一层水作为固定相,而通常把有机溶剂作为流动相。有机溶剂自上而下流动称为下行层析，自下而上流动称为上行层析。流动相流经支持物时，与固定相之间连续抽提，使物质在两相间不断分配而得到分离。溶质在滤纸上的移动速率用Rf值表示。第65页/共69页第66页/共69页2离子交换层析离子交换层析（IonExchangeChromatography简称为IEC）是以离子交换剂为固定相，依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法。离子交换层析中，基质是由带有电荷的树脂或纤维素组成。带有正电荷的称之阴离子交换树脂；而带有负电荷的称之阳离子树脂。第67页/共69页强酸型阳离子交换树脂，带正电的氨基酸与树脂交换而被“挂”在树脂上，从而使其移动得慢，氨基酸被洗出的顺序一般为：酸性氨基酸、中性氨基酸、碱性氨基酸。第68页/共69页第69页/共69页***********（三）非蛋白质氨基酸150多种多是蛋白质中L型α-AA衍生物有一些是β-，γ-，δ-AA有些是D-型AA

第32页/共69页鸟氨酸瓜氨酸第33页/共69页必需氨基酸：维持动物和人体正常发育和行使功能所必需，但不能自身合成，必须由食物中获得。这类氨基酸有8种，包括赖氨酸、甲硫氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸、色氨酸和苯丙氨酸。（四）必需氨基酸和非必需氨基酸第34页/共69页非必需氨基酸：可在动物体内合成，作为营养源不需要从外部补充的氨基酸。第35页/共69页三、氨基酸的酸碱性质（一）兼性离子第36页/共69页第37页/共69页H3N—CH—COOHR+（pH＜pI）H3N—CH—COO-R+（pH=pI）H2N—CH—COO-R（pH＞pI）（二）氨基酸的解离第38页/共69页（三）氨基酸的等电点当溶液为某一pH值时，AA主要以兼性离子的形式存在，分子中所含的正负电荷数目相等，净电荷为0。这一pH值即为AA的等电点（pI）。在pI时，AA在电场中既不向正极也不向负极移动，即处于两性离子状态。第39页/共69页Ka1*Ka2=……侧链不含离解基团的中性AApI=(pK’1+pK’2)/2第40页/共69页甘氨酸滴定曲线第41页/共69页对于侧链含有可解离基团的AApI取决于两性离子两边pK’值的算术平均值酸性AA：pI=(pK’1+pK’R-COO-)/2碱性AA：pI=(pK’2+pK’R-NH2)/2第42页/共69页第43页/共69页第44页/共69页第45页/共69页四、氨基酸的化学反应1.氨基酸间的成肽反应一个氨基酸的氨基与另一个氨基酸的羧基可以结合成肽，两个氨基酸之间形成的酰胺键称为肽键。第46页/共69页2.与茚三酮反应在弱酸性溶液中茚三酮与α-氨基酸共热，引起氨基酸氧化脱氨、脱羧反应，最后茚三酮与反应产物，即氨和还原茚三酮发生作用，生成紫色物质，利用这个反应可以定性或定量地测定各种氨基酸。第47页/共69页3.与2，4-二硝基氟苯反应（Sanger反应）在弱碱性（pH8~9）、暗处、室温或40℃条件下，氨基酸的α-氨基很容易与2,4-二硝基氟苯反应，生成黄色的2,4-二硝基氨基酸（简称DNP-氨基酸）。多肽或蛋白质的N-末端氨基酸的α-氨基也能与DNFB反应，生成一种二硝基苯肽（DNP-肽）。该反应由F.Sanger首先发现因此又称桑格反应（Sangerreaction）。第48页/共69页NO2FO2N+H2N—CH—COOHRNO2O2NHN—CH—COOHR+HF弱碱性DNP-氨基酸（黄色）DNFBSanger法测定N末端氨基酸基础第49页/共69页4.与丹磺酰氯反应丹磺酰