免疫原和抗血清制备技术.pptVIP

免疫原和抗血清制备技术第一节免疫原制备第二节免疫血清制备第三节抗体纯化和判定免疫原和抗血清制备技术第1页

第一节免疫原制备一、细胞性抗原制备二、可溶性抗原制备及判定三、半抗原免疫原制备四、佐剂免疫原和抗血清制备技术第2页

绵羊红细胞制备流程图摇动15-20min4℃可保留3周取适量NS洗涤3次r/min10minNS稀释至2～5%免疫原和抗血清制备技术第3页

细菌细胞抗原制备流程图液体培养或斜面培养37℃24h100℃水浴2～2.5h杀菌无菌试验NS稀释成8～10亿/mlO菌体抗原返回免疫原和抗血清制备技术第4页

起源:组织和细胞,其成份比较复杂。1.组织和细胞成份混合抗原制备2.蛋白质抗原制备3.核酸抗原制备4.类脂多糖抗原制备5.免疫球蛋白片段制备6.纯化抗原判定二、可溶性抗原制备及判定可溶性抗原:蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶类、补体、脂多糖、细菌外毒素和核酸二、可溶性抗原制备及判定返回免疫原和抗血清制备技术第5页

组织和细胞成份混合抗原制备程序上清液澄清所用材料必须是新鲜或低温保留去除包膜或结缔组织脏器进行灌洗洗去血迹及污物NS内含0.5g／LNaN2冷浴中组织剪碎装入捣碎机简内高速粉碎制成组织匀浆液3000r／min×10min取上清液去除细胞碎片及微小组织离心免疫原和抗血清制备技术第6页

细胞破碎技术及评价1.酶处理法2.冻融法3.超声破碎法4.表面活性剂处理细胞破碎技术及评价免疫原和抗血清制备技术第7页

惯用酶类:溶菌酶、纤维素酶、蜗牛酶等1.酶处理法1.酶处理法方法:在一定条件下，能消化细菌和组织细胞。特点:①此法适用各种微生物；②含有作用条件温和；③内含物成份不易受到破坏；④细胞壁损坏程度能够控制。免疫原和抗血清制备技术第8页

2.冻融法原理:因突然冷冻，细胞内冰晶形成及胞内外溶剂浓度突然改变而破坏细胞。2.冻融法完方法:将待破碎细胞置冰箱内冻结，然后迟缓融化，如此重复两次，大部分组织细胞及细胞内颗粒可被融破。特点:此法适合用于组织细胞，对微生物细胞作用较差。免疫原和抗血清制备技术第9页

3.超声破碎法原理:利用超声波机械振动而使细胞破碎。因为超声波发生空化作用（cavitation）使得液体形成局部减压引发液体内部发生流动，漩涡生成与消失时，产生很大压力，使细胞破碎。超声波使用频率从1kHz～20kHz不等，间歇进行，防止长久超声产热，造成抗原破坏。3.超声破碎法特点:①操作简单，重复性很好，节约时间；②多用于微生物和组织细胞破碎。免疫原和抗血清制备技术第10页

4.表面活性剂处理原理:在适当温度、pH及低离子强度条件下，表面活性剂能与脂蛋白形成微泡，使膜渗透性改变或使之溶解。4.表面活性剂处理惯用有:十二烷基硫酸钠(SDS,阴离子型)、二乙胺十六烷基溴（阳离子型）、聚山梨酯（非离子型）、新洁尔灭等。应用:①破碎细菌，且作用比较温和；②提取核酸时，惯用此法破碎细胞。免疫原和抗血清制备技术第11页

蛋白质抗原制备蛋白质是良好抗原，要制备特异性高抗血清通常需要纯化。可采取:1.超速离心法2.选择性沉淀法3.凝胶层析法4.离子交换层析法5.亲合层析法蛋白质抗原制备免疫原和抗血清制备技术第12页

1.超速离心法原理:利用各颗粒在梯度液中沉降速度不一样,使含有不一样沉降速度颗粒,处于不一样密度梯度层内,到达彼此分离目标。1.超速离心法特点:用超速离心或梯度密度离心法纯化抗原，极难将某一抗原成份分离出来。应用：用于少部分大分子抗原和一些比较轻抗原物质分离，如IgM、C1q、甲状腺球蛋白、载脂蛋白A.B等。免疫原和抗血清制备技术第13页

2.选择性沉淀法原理:依据各蛋白质理化特征差异，采取各种沉淀剂或改变一些条件促使蛋白质抗原成份沉淀，从而到达纯化目标。2.选择性沉淀法惯用方法:盐析沉淀法（不一样盐浓度则溶解度不一样）；惯用33～50％饱和度硫酸胺。特点:简单方便，纯度不高，粗提球蛋白。