分子诊断在感染性疾病中的应用(共61张课件).pptxVIP

分子诊断在感染性疾病中的应用;感染的慨念;感染性疾病的分子诊断策略;分子生物学检验技术在感染性疾病中的应用主要包括对病原生物进行鉴定、分型、耐药诊断和治疗过程中的疗效监测等

动态、定量地检测病原体核酸，能对疗效判断和病情预后评价提供客观的依据

目前已经应用于一些重要的感染性疾病，如结核病、病毒性肝炎、艾滋病、SARS、人禽流感等;一、感染性疾病的诊断和治疗监测

;

感染方式

呼吸道、消化道或皮肤损伤侵入机体

所致疾病

疾病种类多样化

以肺结核为主;生物学主要特点：

1.结核分枝杆菌细胞壁中含有大量脂质

2.引起的疾病都呈慢性，并伴肉芽肿

3.抗酸染色阳性;实验室诊断现状;分子生物学检测方法;现代分子生物学快速诊断;共价封闭环状结构

标准株结核分枝杆菌

基因组全长4.4kb,

包含4000个蛋白质编码基因

和50个RNA编码基因

;MDR早期诊断;高效：一个样本可同时检测结核分枝杆菌和NTM

快速：4周（菌培）3小时

灵敏：10个菌/反应（TB）；102个菌/反应（NTM）

;高效：同时检测17种分枝杆菌（包括TB）

快速：＞4周（菌种鉴定）6小时

灵敏：103个菌/反应

;通量：两个一线抗结核药（MDR）

速度：8周（药敏）6小时

灵敏度：103个菌/反应;病毒性疾病的分子检测;乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus,HBV）;有许多因素影响着PCR方法，如标本处理及储存形式，引物设计、扩增倍数、反应条件、DNA产物的污染、扩增后产物检测系统等

率为100%。

(3)用型特异的引物对HCV核心基因巢式PCR。

HCV基因型的筛选试验有：

pre-CHBeAg

人类免疫缺陷病毒

（HIV）

现代分子生物学快速诊断

SARS冠状病毒（SARSCoV）是一种新的变种的冠状病毒

急性感染时期HBV的标志物

应采取必要的质控规程，包括阳性对照和阴性对照。

靶细胞：CD4+T细胞

HCV分为6个主要基因型（Simmonds），HCV亚型已超过50个.

其正链RNA分子大小为

不同型的HPV侵犯的部位和所致疾病也不同

LIPA方法

tuberculosis);HBV基因组结构;急性感染时期HBV的标志物;HBV分子诊断方法;1．样本处理（样本处理区）

2．???酸扩增

2.1试剂配置（PCR前准备区）

2.2加样（样本处理区）

2.3PCR扩增（检测区）

;HBVDNAFQ-PCR（real-timePCR）;支链DNA（bDNA）技术;还可以用于乙肝病毒基因检查的方法主要有：荧光PCR法、竞争PCR法、PCR酶联免疫吸附法、荧光标记物法和PCR酶联化学发光等方法。;变异株与耐药突变检测;HBV耐药突变类型及其核苷酸、氨基酸变化;第28页，共61页。;第29页，共61页。;第30页，共61页。;第31页，共61页。;46.91℃54.64℃50.74℃;丙型肝炎病毒（HCV）;HCV-RNA定性试验

引起的疾病都呈慢性，并伴肉芽肿

HBV耐药突变类型及其核苷酸、氨基酸变化

检测基因型方法一般分为二类：

高效：同时检测17种分枝杆菌（包括TB）

5’-AAGCCCTACGAACCACTGAACAAATGGCAC-3’

人类免疫缺陷病毒

（HIV）

传播途径：主要通过接触感染

灵敏：10个菌/反应（TB）；

包含4000个蛋白质编码基因

中国：50%~70%的人受过感染，8%~10%是HBV携带者

Step5:Translation

检测样本中HBVDNA5×107copies/ml，既可直接报告为5×107copies/ml，也可用正常人血清按10倍剃度做相应稀释，使其拷贝数落在1×105-5×107copies/ml范围内，再重新测定，测定结果应以稀释倍数进行校正

速度：8周（药敏）6小时

基因组为RNA双分子，与其它逆转录病毒基本相同;HCV基因组（单链RNA）;pre-S2pre-S2蛋白

有11个ORF，编码：依赖于RNA的RNA聚合酶（rep）、4种结构蛋白（S,E,M,N）、5种未知蛋白

基于rpoB（利福平）和katG/inhA（异烟肼）的基因突变，对耐多药结核病做出快速诊断。

ACD/EDTA/HE