细胞工程胚胎工程.ppt

******卵细胞的采集和成熟培养（1）卵细胞的采集1）超数排卵：利用促性腺激素处理，使得卵巢中有更多的卵泡发育，更多的卵被排出，这个过程就称为超数排卵（superovulation）。通过从输卵管中冲取的方式获得成熟的卵子。2）从活体卵巢中采集卵母细胞：借助超声波探测仪、内镜或腹腔镜直接从活体动物的卵巢中吸取卵细胞。3）从屠宰后母畜卵巢上采集卵母细胞：从刚屠宰的母畜体内摘出卵巢，无菌条件下用注射器或真空泵抽吸卵巢表面一定直径卵泡中的卵母细胞。第31页,共56页，星期六，2024年，5月（2）卵母细胞的选择和成熟培养采卵获得的卵母细胞绝大部分与卵丘细胞形成卵丘卵母细胞复合体（cumulusoocytecomplesx）,根据卵母细胞的形态规则，细胞质均匀程度及外围卵丘细胞包围情况，挑选A,B级卵母细胞，洗涤后，在成熟培养基中培养。观察出现放射冠后，备用。超数排卵采集的卵母细胞已经在体内发育成熟，因而不需培养可直接与精子受精。第32页,共56页，星期六，2024年，5月2.精子的获能处理

获能有体内和体外方法：?体内获能是从交配的母畜子宫内冲取精子用于受精。?体外获能分两步：精子洗涤除去杂质、死精子、低活力精子、冻精保护液及稀释液，然后使用高离子强度液，钙离子载体，肝素等促使钙离子进入精子顶体，刺激精子内部pH升高，诱发精子获能。第33页,共56页，星期六，2024年，5月3.体外受精将获能的精子和成熟的卵子置于受精液中共同培养，使之完成受精过程。为了提高体外受精的成功率，可以借助显微操作仪将精子直接注入卵母细胞质（ICSI）或透明带(SUZI)下，完成受精过程。显微受精技术避免了由透明带或卵质膜所形成的受精障碍，使受精率和准确率大大提高。第34页,共56页，星期六，2024年，5月4.受精卵的体外培养受精卵需要在培养液或输卵管中发育到桑葚胚或囊胚阶段，移植到受体后才能获得较高的妊娠率。发育阻滞：在化学组分确定的培养基中，早期胚胎往往不能完成从受精卵到囊胚的发育全过程,而停顿在某个特定的发育时期.这种现象被称为“发育阻滞”。克服发育阻滞的方法：1.改进培养液的成分，改善培养条件，满足发育所需物质，去除不利成分。2.利用体细胞共同培养体系，提供发育所需物质条件。5.胚胎移植第35页,共56页，星期六，2024年，5月体外受精的意义及用途：1.可用于研究哺乳动物的配子发生、受精、和胚胎早期发育机制。2.治疗人类男性和雄性动物的生殖不育2.在充分利用优良品种资源、缩短家畜繁殖周期、加快品种改良速度方面有重要价值。3.是哺乳动物胚胎移植、克隆、转基因和性别控制等现代生物技术不可缺少的组成部分。总之，体外受精技术已经广泛应用于发育生物学、医学、畜产学、实验动物学等各个领域。第36页,共56页，星期六，2024年，5月体外受精存在的问题：1.效率有待提高2.体外培养体系有待完善3.基础理论研究有待加强第37页,共56页，星期六，2024年，5月四、胚胎移植技术胚胎移植（embryotransfer)：俗称“借腹怀胎”，“借劣质动