手性药物HPLC分析课件.ppt

在以上色谱条件下,L-甲基多巴对照品的色谱图中,在D-对映体位置无杂质峰.方法学考察-专属性

四、手性药物的HPLC分析方法*PPT学习交流线性和线性范围置于2mL量瓶中甲醇定容储备液精密量取一定体积的储备液重蒸水定容0.02mg/mL0.06mg/mL0.10mg/mL0.15mg/mL0.20mg/mL进样线性回归计算2.0mg对照品系列浓度溶液四、手性药物的HPLC分析方法*PPT学习交流精密度在规定的测试条件下,同一个均匀样品,经多次取样测定所得结果之间的接近程度.一般用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示.四、手性药物的HPLC分析方法*PPT学习交流仪器精密度以浓度为0.10mg/ml的对照品溶液连续进样五次,记录峰面积,求得RSD为0.36%.n12345RSD(%)峰面积A0.36四、手性药物的HPLC分析方法*PPT学习交流日内和日间精密度配置浓度为0.02、0.10、0.20mg/mL的L-甲基多巴样品溶液,进行日内和日间精密度的考察,结果如下表所示.四、手性药物的HPLC分析方法*PPT学习交流测定的结果与真实值或参考值接近的程度,一般以回收率(%)表示.准确度加入量（?g）测得量（?g）回收率（%）平均回收率（%）RSD（%）30303060606012012012030.0030.0329.8760.9159.4060.31119.1119.4120.4100.0100.199.55101.599.00100.599.2499.52100.399.89100.399.921.91.51.7四、手性药物的HPLC分析方法*PPT学习交流检测限指试样中被测物能被检测出的最低量由于手性金属离子配位体的使用,流动相的背景吸收较强,本底值较高,基线波动较大.L-甲基多巴检测限为0.75?g/ml四、手性药物的HPLC分析方法*PPT学习交流对照溶液（0.10mg/mL）供试品溶液的D-甲基多巴的峰面积与对照溶液主成分（L-甲基多巴）的峰面积比较供试品溶液（10.0mg/mL）进样稀释调节检测器灵敏度使主成分色谱峰面积满足准确测量要求（峰高为满刻度的20％）取供试品溶液进样计算限度主成分自身对照法测定L-甲基多巴样品中D-对映体的限量*PPT学习交流L-甲基多巴样品（0.1mg/ml）L-甲基多巴样品（10.0mg/ml）*PPT学习交流3.柱前手性衍生化法四、手性药物的HPLC分析方法対映异构体与手性试剂反应,其产物为相应的非対映异构体对.如醇类与手性酸或酰氯酯化；胺类或氨基酸与手性异硫酸酯类或硫脲等反应.*PPT学习交流3.柱前手性衍生化法四、手性药物的HPLC分析方法本法需要高光学纯度的手性衍生化试剂，衍生化反应繁琐费时,各对映体衍生化反应的速率不同.可采用价格便宜的非手性柱,也可通过衍生化反应提高检测灵敏度.本法是当前手性药物拆分、尤其是生物样品中药物对映体分离、测定常用方法.*PPT学习交流3.柱前手性衍生化法四、手性药物的HPLC分析方法常用衍生化试剂：羧酸衍生物、胺类、异氰酸酯、异硫酸酯、萘衍生物等*PPT学习交流三类手性分离方法的比较四、手性药物的HPLC分析方法手性衍生法优点：应用条件相对简易,只需采用普通的液相色谱柱,而且通过衍生化可增加灵敏度；缺点：样品中相关化合物需预先分离、衍生化试剂的光学纯度要求高.*PPT学习交流三类手性分离方法的比较四、手性药物的HPLC分析方法手性流动相添加剂法缺点：可拆分的化合物范围有限,某些添加剂不够稳定而且往往会干扰检测.优点：对固定相也无特殊要求,样品的非対映异构体络合具有可逆性,而且易于制备；*PPT学习交流三类手性分离方法的比较四、手性药物的HPLC分析方法优点：应用的广泛性,定量可靠性强,采用本法考察的化合物已达数千种；手性固定相法缺点：样品有时也需作柱前衍生,对样品