高中生物学二轮总复习精品课件 专题十 细胞工程和基因工程 专题十 细胞工程和基因工程 (2).pptVIP

答案(1)限制酶、DNA连接酶Ca2+处理法(2)有一个至多个限制酶切割位点,含有特殊的标记基因,能够进行自我复制(3)PCR技术DNA双链复制防止破坏原有结构导致基因在受体细胞内无法稳定存在并表达(4)转化所有生物共用一套遗传密码解析(1)①过程为构建基因表达载体的过程,需要限制酶和DNA连接酶,③过程是将重组质粒导入农杆菌细胞,应用Ca2+处理法。(2)高质量的载体,需要具备在受体细胞中能稳定存在并能大量复制,且对受体细胞无害;有一个至多个限制酶切割位点;含有特殊的标记基因,便于筛选等条件。(3)目的基因常用的扩增技术是PCR技术,其原理是DNA双链的复制,应将基因插入T-DNA的非必需区域,否则会破坏原有结构导致基因在受体细胞内无法稳定存在并表达。(4)目的基因进入受体细胞后,维持稳定和表达的过程称为转化,T-DNA虽然在原核生物中产生,但是在受体植物细胞中也能表达是因为所有生物共用一套遗传密码。3.报告基因是指一类易于检测且实验材料本身不具备的基因。阿尔茨海默病(AD)是由淀粉样前体蛋白(APP)过量表达导致的神经系统退变性疾病,用增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)作为报告基因,将EGFP基因与APP基因融合,可方便、经济、快速地筛选出促进人APPmRNA降解的药物。研究表明,EGFP与APP基因融合后,虽然能全部转录,但是仅有EGFP蛋白得到表达。EGFP基因与APP基因融合过程如下图所示。回答下列问题。(1)APP751、EGFP基因的cDNA是以其mRNA为模板经过程形成的,将其储存于细菌质粒中,属于构建。?(2)据图分析,Klenow酶的作用是。切割pcDNA3.1质粒获得APP751基因时,研究人员没有选择直接用HindⅢ、XbaⅠ同时切割,而是历经①→②→③的复杂过程,原因是。?(3)COS-7细胞来源于非洲绿猴肾成纤维细胞,培养这类细胞时,为保证细胞生长和避免污染,应分别在合成培养基中添加,传代培养不宜超过10代,原因是。?答案(1)逆转录基因文库(部分基因文库或cDNA文库)(2)将XbaⅠ切割获得的黏性末端催化产生平末端直接用HindⅢ、XbaⅠ同时切割,产物两端都是黏性末端,而经过①→②→③可使目的基因两端分别为平末端和黏性末端,才能与被SmaⅠ与HindⅢ切开的载体连接(3)血清和抗生素细胞在传至10代后,增殖减缓甚至停止,部分细胞的细胞核型可能发生变化本课结束对点训练题组一精典对练——拿高分?题型一围绕PCR技术原理与应用,考查科学思维和科学探究1.荧光定量PCR技术可定量检测样本中某种DNA含量。其原理是在PCR体系中每加入一对引物的同时加入一个与某条模板链互补的荧光探针,当相关酶催化子链延伸至探针处,会水解探针,使荧光监测系统接收到荧光信号,即每扩增一次,就有一个荧光分子生成。下列叙述正确的是()A.引物是单链DNA,引物的碱基序列均相同B.DNA合成方向是从子链的3端向5端C.达到设定荧光强度所经过的循环次数与其起始模板数量无关D.该项技术结合逆转录可用于检测某种细胞中不同基因的转录水平答案D解析引物是单链的DNA或RNA,扩增不同的DNA,所用的引物的碱基序列不相同,A项错误。DNA合成方向是从子链的5端向3端,B项错误。由题干可知,达到设定荧光强度所经过的循环次数与其起始模板数量呈正相关,C项错误。cDNA是以mRNA为模板逆转录形成的,故若以cDNA为模板,该项技术便可用于检测某种细胞中不同基因的转录水平,D项正确。2.(不定项选择题)大引物PCR定点诱变常用来研究蛋白质结构改变导致的功能变化。单核苷酸的定点诱变仅需进行两轮PCR反应即可获得,第一轮加诱变引物和侧翼引物,第一轮产物作第二轮PCR扩增的大引物,过程如下图所示。下列叙述正确的是()A.第一轮PCR过程中复性所用的温度与第二轮PCR复性的温度是一样的B.PCR扩增的定点诱变产物通常需要连接到载体分子上才能表达出相应的性状,该定点诱变产物需具备启动子、终止子等结构才能进行转录和翻译C.第二轮PCR所用的引物是第一轮PCR的产物DNA的两条链D.将某功能蛋白的第17位Cys(UGU)改造成Ser(UCU),属于蛋白质工程答案BD解析为了使两轮PCR反应在同一支试管中进行,引物设计时应考虑不同的复性温度,第二轮PCR的复性温度应该比第一轮高,A项错误。若要使得目的基因可以表达出蛋白质,则需要在产物上具备启动子和