DB34T 2167-2014 油菜黑胫病菌鉴定方法.pdfVIP

ICS65.020

B30

DB34

安徽省地方标准

DB34/T2167—2014

油菜黑胫病菌鉴定方法

DetectionandidentificationofLeptosphaeriabiglobosa(Desm.)Ces.etDeNot.

2014-09-23发布2014-10-23实施

安徽省质量技术监督局发布

DB34/T2167—2014

前言

本标准依据GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由安徽省农业科学院作物研究所提出并起草。

本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。

本标准主要起草人：荣松柏、李强生、胡宝成、江莹芬、陈凤祥、吴新杰、费维新、侯树敏、范志

雄、雷伟侠、郝仲萍。

I

DB34/T2167—2014

油菜黑胫病菌鉴定方法

1范围

本标准规定了油菜黑胫病菌的现场和室内鉴定的依据和检测方法。

本标准适用于油菜黑胫病菌的鉴定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3鉴定依据

油菜黑胫病菌Leptosphaeriabiglobosa(Desm)Ces.deNot.属真菌界(Fungi)，子囊菌门

(Ascomycota)，座囊菌纲(Dothideomycetes)，格孢腔菌目(Pleosporales)，格孢腔菌科

(Pleosporaceae)，小球腔菌属(Leptosphaeria)；无性态属茎点霉属Phomalingam。

由Leptosphaeriabiglobosa病菌引起的油菜病害称为油菜黑胫病。

鉴定依据：以油菜黑胫病为害症状、病菌形态学特征、PCR反应和致病性测试结果为鉴定依据。

4主要仪器与用具

生物显微镜、体视显微镜、培养箱、植物生长箱、高速冷冻离心机、纯水仪、超净工作台、高压灭

菌锅、液氮罐、制冰机、PCR仪、凝胶成像系统、电泳仪、冰箱、旋涡振荡器、电子天平（感量0.01g）、

烘箱、培养皿、酒精灯、解剖刀、接种针、移液器、离心管。

5主要试剂与材料

5.1试剂

次氯酸钠，链霉素，氨苄青霉素，商用DNA提取试剂盒或DNA提取试剂：Trisbase，EDTA，NaCl，

SDS，β-巯基乙醇，聚乙烯基吡咯烷酮（PVP），林菲罗琳；PCR试剂：PCRbuffer，Mgcl2，dNTP，Taq

酶；凝胶电泳试剂：琼脂糖，TAE，LoadingBuffer，EB。

5.2培养基

琼脂培养基（Agar），马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA-potatodextroseAgar），马铃薯葡萄糖

肉汤（PDB-potatodextrosebroth）液体培养基，V8果汁琼脂培养基。见附录A。

5.3对照菌株

1

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油菜黑胫病菌（Leptosphaeriabiglobosa(Desm)Ces.