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兔血清抗体分离纯化
抗血清纯化的目的是尽量除去抗血清中与目的抗体不相关的成分，以防止
抗体外的其他血清成分对试验结果产生影响。因此只能根据不同目的的要求，
从抗血清中除去容易干扰的有关成分，或提取相应的免疫球蛋白。
抗血清纯化的方法主要有粗提法和精制法两个过程。粗提法主要常用硫酸铵
盐析法，精制法分非特异性和特异性两种类型。非特异性方法如葡聚糖凝胶过
滤法、离子交换层析法，其方法均系基于蛋白质分子的物理性质。特异性方法
如免疫吸附法，其方法基于抗原抗体的特异性反应。
一、盐析法(Saltfractionation)（粗提）
【实验原理】
当用中性盐加入蛋白质溶液，中性盐对于水分子的亲和力大于蛋白质，于
是蛋白质水分子周围的水化膜减弱甚至消失；同时，中性盐加入蛋白质溶液后，
由于离子强度发生改变，蛋白质表面电荷大量被中和，更加导致蛋白质溶解度
降低，使蛋白质分子间聚集而沉淀。
不同蛋白质由于所带电荷不同以及水化程度不同，加入不同浓度的中性盐
可分段从溶液中沉淀出来。
蛋白质在不同浓度的盐溶液中相对溶解度不同，血清γ球蛋白在一定浓度
盐溶液中易于沉淀，而白蛋白则不易沉淀，据此可将二者分离。
盐析法：硫酸铵分级沉淀
【主要试剂与仪器】
实验材料：兔血清（20ml-200ml）
试剂：饱和硫酸铵溶液（用前以5mol/LNaOH调至pH7.4）、0.01mol/L
Ph7.4磷酸盐缓冲液（PhosphateBufferedSalinePBS）、奈氏试剂
实验器材：三角瓶、烧杯、各种吸管、小试管、量筒、布氏漏斗、透析袋（用
前用PBS或双蒸水煮沸10min）等
仪器：搅拌器、离心机、电泳仪等
【溶液配制】
a、饱和硫酸铵溶液的配制：
取500ml蒸馏水加热至70～80℃，称(NH)SO400～425g溶于蒸馏水
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中，搅拌20min，趁热过滤，冷却，配制好的饱和硫酸铵溶液，瓶底应有结晶
析出，在使用前用28%的氨水调pH至7.4。
b、磷酸盐缓冲液的配制：
贮存液A液0.2MNaHPO·2HO31.2g，加蒸馏水1000ml
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B液0.2MNaHPO·12HO71.7g，加蒸馏水至1000ml
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应用液取A液19ml加B液81ml混合，再以生理盐水作10倍稀释，加入
NaCl至终浓度为0.85%，即为PBS。
c、奈氏试剂的配制：
取HgI11.5g，KI8.0g，加双蒸水至50ml；搅拌溶解后过滤，滤液中
再加入浓度为20%的溶液NaOH50ml。
【方法步骤】
（1）取制备好的血清20ml，加入20ml磷酸盐缓冲液混匀，然后逐滴加入
(NH)SO饱和溶液40ml，使成50%(NH)SO溶液，边加边搅拌，防止形
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成团块减低沉淀物的特异性，充分混合，在4℃条件下静止3h以上，
使其充分沉淀。
（2）低温高速10000r/min离心10min，弃去上清液。
（3）用6ml磷酸盐缓冲液溶解沉淀，再加(NH)SO饱和溶液3ml，使成为
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33%(NH)SO溶液，充分混合，4℃静止3h以上。
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（4）低温高速
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