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XX病毒核酸检测试剂盒

（RT-PCR法）验证实验报告

试验人员：XXX

试验日期：XXXX年XX月XX日

试验单位：XXX实验室（盖章）

XX病毒核酸检测剂盒验证实验报告

受XX大学XX学院委托，对XX实验室研制的XX病毒核酸检

测剂盒（RT-PCR法）进行验证性检测，现将结果报告如下：

1实验材料

1.1试剂盒样品

4个XX病毒核酸检测试剂盒（RT-PCR法），规格均为48份/盒，

均由XX实验室提供。每个试剂盒包装内含有NDVUN反应液A（棕

色）1管（240µL）、NDVUN反应液B（白色）1管（48µL）、NDVUN

反应液C（黄色）1管（24µL）、NDVUN阴性质控品（绿色）1管（1

mL）、NDVUN阳性质控品（红色）1管（50µL）。

1.2检测样品

检测样品包含：XX病毒（禽类病毒）阳性样品10份（包括10

种不同XX病毒毒株的cDNA样品）和阴性样品6份（包括1份灭菌

水和5份其他禽源病毒的cRNA样品）。均由XX实验室提供。

2实验方法

2.1样品设盲

试剂盒研制单位将16份检测样品1~16分别编号，并将样品背景

书面材料交给复核员保存，待试验完成后与检验员解盲。

2.2样品检测

2.2.1PCR扩增

取适量PCR反应管，每管加入NDVUNPCR反应液A5µL、

NDVUNPCR反应液B1µL、NDVUN反应液C0.5µL；于上述PCR

1

反应管中分别加入阳性质控品、阴性质控品和16份待测标本核酸各

5µL（建议待测核酸RNA或cDNA量为10pg～1µg）；再补加入

DEPC水13.5µL，将总体积调整至25uL，8000rpm离心数秒，放入

PCR扩增仪。

PCR反应条件设置为：50℃30min，1个循环；95℃3min，1

个循环；94℃30s→55℃30s→72℃30s，30~35个循环；72℃7

min。保存文件，运行。

2.2.2电泳检测

制胶：用TAE电泳缓冲液配制2%琼脂糖凝胶（已经预先加入核

酸染色剂EB替代物）。

电泳：待胶凝固后，取10~25µLPCR扩增产物（使用前需加入

10×LoadingBuffer）点样于琼脂糖凝胶孔中，以120~150V的电压于

TAE电泳缓冲液中电泳约20min；于紫外灯下观察结果。

2.2.3结果判定

反应结束后，以DL2000的Marker作为参考，阳性对照出现400

bp扩增带，阴性对照无带出现（引物二聚体带除外）时，检测结果成

立。被检样品出现400bp扩增带为XX病毒阳性，否则为阴性。

3实验结果

3.1PCR电泳结果

（电泳图）

2

3.1盲样检测结果

表1样品检测解盲结果

样品编号123456789

样品属性阳性阳性阳性阳性阳性阳性阳性阳性阳性

400bp处有

有有有有有有有有有

无条带

结果判定阳性阳性阳性阳性阳性阳性阳性阳性阳性

阳性阴性

样品编号1