注射用交联透明质酸钠凝胶的制备与其体外抗酶降解性的研究.pdf

陈建英汪敏刘杰贺艳丽·

（山东省生物药物研究院，山东，济南２５０１０８）

摘要：目的筛选交联反应条件，制备强抗酶降解的注射用交联透明质酸钠凝胶（ＨＡ－ｇｅｌ），并对其体

外抗酶降解性的测定方法进行研究．方法用１，４一丁二醇二缩水甘油醚（ＢＤＤＥ）交联透明质酸钠制备

采用正交试验考察六个因素对交联反应的影响，

ＨＡ—ｇｅｌ，对其体外抗酶降解性的测定方法进行确证；

浓度与产物显色后的吸收度呈线性关系，精密度高（ＲＳＤ＝０．５８％，ｎ＝６），回收率为９８．８士０．６％（

＝０．８７％，ｎ＝６），测定溶液在室温ｈ内稳５定（ＲＳＤ＝１．１４％，ｎ＝６）．正交试验直观分析和方差分析显

示透明质酸钠（ＨＡ）

的起始反应浓度、ＢＤＤＥ与ＨＡ的比例对交联反应具有显著性影响，ＮａＯＨ浓度１％、ＨＡ平均分子量

反应温度５０℃、ＢＤＤＥ与ＨＡ的比例ｌＯ％（ｇ／ｇ）、反应时间４ｈ和ＨＡ浓度１５％的反应条件下，可得到抗

酶降解性最好的ＨＡ－ｇｅｌ．结论选择适宜反应条件可以制备得到体外抗酶降解性强的ＨＡ－ｇｅｌ，为

步开发注射美容产品奠定了基础．

关键词：交联透明质酸钠正交试验酶降解体外

透明质酸（ｈｙａｌｏｕｒｏｎｉａｃｉｄｅ）是人和动物皮肤、玻璃体、关节滑液和软骨组织的重要成分，它由

（卜Ｂ－４）Ｄ－葡糖醛酸和（卜Ｂ－３）Ｎ－乙酰基一Ｄ＿氨基葡糖双糖单位重复连接组成，是一种链状聚阴离

子黏多糖ｕ１。商品透明质酸钠来源于动物组织或微生物发酵，广泛应用于食品、日化和医药领域。高纯

度的医用级透明质酸钠已被制成注射剂，用于眼科手术、骨科手术、预防术后粘连、治疗骨性关节炎和

类风湿性关节炎比’。此外，也被用于面部注射美容，改进皮肤外观和结构、减轻皱纹、阻止皮肤衰老或

改进唇部形状Ｈ１。由于透明质酸钠良好的生物相容性，极少产生副作用，与胶原类注射美容产品相比，

该类产品更易于被接受，但由于它在体内很快被扩散和降解，难以维持理想效果Ｈ１。近年来，透明质酸

经修饰或交联后获得了一些毒性小、生物相容性好的抗降解产物，陆续被开发为多种医药产品磕１，其中缩

水甘油醚（环氧基）化合物交联的透明质酸钠，是一种强抗降解性、高安全性的凝胶，可用于眼科玻璃

体替代、防粘连、软组织填充以及缓释药物储库等产品陋１。目前，国外最热销的美容产品ＰＥＲＬＡＮ和ＲＥＳＴＹＬ

（美国Ｑ－ＭＥＤ公司）即属该类交联产品，在临床应用多年，效果良好且鲜见毒副作用报道盯’，我国也曾

有文献涉及类似的交联方法慢１，交联产品的最佳反应条件及其抗降解性未见研究和报道，国内也没有同

类产品生产和上市。本文通过设计一个正交试验，初步考察影响交联反应的重要因素，以期获得最佳反

应条件，作为开发注射美容产品的基础。

１．材料和仪器

１．１－材料

发酵法生产的透明质酸钠（简称ＨＡ）（注射级，山东福瑞达生物化工有限公司）：１，４一丁二醇二缩

水甘油醚（简称ＢＤＤＥ）（美国Ｓｉｇｍａ－－Ａｌｄｒｉｃｈ化学品公司）；咔唑（中国医药集团上海化学试剂公司

口分装）；注射用玻璃酸酶（简称ｌｔＡｓｅ）（上海第一生化药业公司，１５００ＩＵ／支）；其它为分析纯化学试剂。

１．２．仪器

８４５３型紫外一可见分光光度计（美国Ａｇｉｌｅｎｔ公司）；ＡＴ２６１型电子分析天平和３２０型ｐＨ计（瑞

Ｔｏｌｅｄｏ公司）；１Ｔ６ＧＧ台式Ｌ高速离心机（上海医用分析仪器厂）；ＨＺ０－２数显全温振荡器（江

Ｍｅｔｔｌｅｒ

苏省金坛市医疗仪器厂）；ＪＪ－１增力电动搅拌器（江办金坛医疗仪器厂）；ＳＧ－３００Ａ多功能食品粉碎机（天

津达康电器公司）。

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２．方法

２．１．交联透明质酸钠凝胶的制备

取姒ｌｇ，与适量含有ｌ，４一丁二醇二缩水甘油醚的ＮａＯｎ溶液混合均匀，保温反应一段时间后，

浸泡于５０℃蒸馏水，滴加适量０．０５ｍｏｌＨＣＩ调ｐＨ７．Ｏ，纯化１０小时后换磷酸盐缓冲溶液（简称ＰＢＳ，每

１０００ｍｌ含有ＮａＨｚ．Ｐ０４·２№０１７９，ｐＨ７．２），平衡４小时。过滤收

９０ｍｇ，Ｎａ２ＨＰ０４·１２Ｈ：｛０１．１２９，ＮａＣＩ

集凝胶块，粉碎为直径０．５＂－１．０ｍｍ的凝胶颗粒，１００℃加热灭菌３０ｒａｉｎ。

２．２．体外