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白蛋白纳米基因载体的制备与表征

【摘要】目的研制白蛋白纳米基因载体，评估白蛋白纳米粒用作基因载体

的可行性。方法采用去溶剂化法制备白蛋白纳米粒，并通过控制转速、pH值、

搅拌时间三个变量来考察白蛋白纳米粒的表征变化情况，以PicoGreen荧光法来

测白蛋白纳米载体的基因转载率，并用流式细胞仪检测膀胱癌细胞的基因转染

率。结果控制转速1000RPM，自然状态下的溶液pH值(6.9)，持续搅拌12h

条件下，制得满足基因载体需要的白蛋白纳米粒的平均粒径(253.1±11.9)nm，

zeta电位(-34.0±4.5)mV，PDI0.43±0.04，性质相对稳定，基因转载率为

(97.61±0.06)%，转染率为(48.21±5.94)%。结论单纯质粒很难进入细胞核高表达，

借助白蛋白纳米载体，使高效的基因转染成为可能。白蛋白纳米粒有望被广泛应

用为二次基因转载工具。

【关键词】人血清白蛋白纳米粒；基因载体；纳米粒

基金项目：广东省科技计划资助项目(项目编号：2009B060700099)

单纯质粒转染肿瘤细胞时，很容易被细胞内各种酶降解，能够进入细胞核进

行表达的质粒很少，而白蛋白纳米载体能很好地保护质粒免受细胞内各种酶的降

解［1］，从而有效地介导质粒DNA(plasmidDNA,pDNA)与肿瘤细胞DNA的

整合，获得重组质粒在肿瘤细胞核内的稳定、持久表达。近10年国内外的研究

也确实证实了白蛋白纳米载体是一种良好的非病毒基因投递系统［2-4］，具有

结合浓缩DNA及将DNA高效地靶向导入各种细胞的能力［5-6］。

白蛋白纳米粒最初被广泛应用于制备缓释以及控释药物方面研究［7］，

研究表明白蛋白纳米粒具有良好的缓释功能，易被生物降解，无生物毒性，从而

推动了白蛋白纳米粒用作基因载体的研究［8］。而作为基因载体的白蛋白纳

米粒要求粒径相对较小、携带合适的表面电荷，性质相对稳定，制备过程不能引

入对目的基因有损伤的物理、化学及生物因素。本研究将详细阐述如何获取满足

实验需求的白蛋白纳米基因载体，并进一步评估白蛋白纳米粒用作基因载体的可

行性，为将来接下来白蛋白纳米粒用作基因载体转载超抗原SEA基因靶向灌注

治疗膀胱癌的研究奠定基础。

1材料与方法

1.1材料与仪器人血清白蛋白A1653(sigma公司)，50%戊二醛(广州齐云生

物技术公司)，无水乙醇(南京化学试剂有限公司)，扫描电镜JSM-6360LV(日本

电子)，ZetasizerNano-ZS90(英国马尔文公司)，SHT型精密数显磁力搅拌电热套

(菏泽祥龙电子科技有限公司)，电子天平BP221S(德国sartorius)，超纯水器

MILLI-QB(美国MILLIPORE)，ALLEGRATM64R(BECKMAN)，漩涡混合仪

XW-80A(其林贝尔仪器公司)，人膀胱癌细胞株T24(上海细胞生物研究所)，RPMI

1640(GIBCO公司)，10%小牛血清等。

1.2制备白蛋白纳米粒(humanserumalbuminnanoparticles,HSA-NPs)的基本

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过程：①电子天平精确称取30mg人血清白蛋白，加入纯水配成5ml溶液，用

漩涡混合仪混匀。②室温(25℃)持续搅拌(1,000RPM)下，滴加(1ml/min)无水乙

醇6.5ml。③继续搅拌1h后