DB34T 2795-2016 猪传染性胃肠炎病毒与猪流行性腹泻病毒二重RT-PCR检测方法　　.docxVIP

ICS11.220B41

DB34

安徽省地方标准

DB34/T2795—2016

猪传染性胃肠炎病毒与猪流行性腹泻病毒二重RT-PCR检测方法

DuplexRT-PCRassayfordetectionofporcinetransmissiblegastroenteritisvirusandporcineepidemicdiarrheavirus

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2016-12-30发布2017-01-30实施

安徽省质量技术监督局发布

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DB34/T2795—2016

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由安徽省农业科学院畜牧兽医研究所提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：安徽省农业科学院畜牧兽医研究所。

本标准起草人：潘孝成、张丹俊、赵瑞宏、沈学怀、戴银、胡晓苗、杨永新、周学利、侯宏艳、王重龙、李庆岗、张玉、王杨龙、陈福军、何为俊。

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DB34/T2795—2016

猪传染性胃肠炎病毒与猪流行性腹泻病毒二重RT-PCR检测方法

1范围

本标准规定了猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)与猪流行性腹泻病毒(PEDV)二重RT-PCR检测方法的技术要求。

本标准适用于猪肠内容物、粪便以及细胞培养物中TGEV和/或PEDV核酸的检测。

2缩略语

下列缩略语适用于本文件。

TGEV:猪传染性胃肠炎病毒(porcinetransmissiblegastroenteritisvirus)

PEDV:猪流行性腹泻病毒(porcineepidemicdiarrheavirus)

PCR:聚合酶链式反应(polymerasechainreaction)

RT-PCR:反转录聚合酶链式反应(reversetranscription-polymerasechainreaction)RNA:核糖核酸(ribonucleicacid)

DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid)DEPC:焦炭酸二乙酯(diethylpyrocarbonate)

Taq酶：TaqDNA聚合酶(TaqDNApolymerase)

dNTP:脱氧核糖核苷三磷酸(deoxy-ribonucleosidetriphosphate)M-MLV:莫洛尼氏鼠白血病病毒(moloneymurineleukemiavirus)PBS:磷酸缓冲液(phosphatebuffersolution)

TAE:Tris-乙酸电泳缓冲液(trisacetate-EDTAbuffer)

EB:溴化乙锭(ethidiumbromide)

3主要仪器

3.1PCR扩增仪。HYPERLINK

3.2台式低温高速离必机(最大离心使2000g传播或其他用途

3.3电泳仪。

3.4凝胶成像系统。

3.5冰箱(-20℃;-80℃)。

3.6微波炉。

3.7分析天平(准确度0.01g以上)。

3.8水浴锅。

3.9微量移液器(2.5μL;10μL;200μL;1000μL)。

4试剂和材料

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4.1RNA抽提试剂：Trizol或其他商品化RNA提取试剂。

4.2氯仿、异丙醇、无水乙醇。

4.3M-MLV反转录酶。

4.4RNA酶抑制剂。

4.5DEPC处理的灭菌水。

4.6TaqDNA聚合酶。

4.7dNTP。

4.8DNA分子质量标准(DL2000DNAMarker)。

4.9RT-PCR反应试剂。

4.10EB(10μg/μL)或核酸染料。

4.11磷酸盐缓冲液(PBS,0.01mol/L,pH7.2),见附录A中的A.1。

4.1250×TAE电泳缓冲液，见附录A中的A.2。

4.131%琼脂糖凝胶，见附录A中的A.3。

4.14引物：

——TGEV扩增