中国药典2010版药品微生物检验指导原则课件.ppt

中国药典2010版药品微生物检验指导原则(*三、菌种微生物实验过程中，实验菌株可能是最敏感的，因为它们的生物活性和特性依赖于合适的试验操作和贮藏条件。实验室菌种的处理和保藏的程序应标准化，使尽可能减少菌种污染和生长特性的改变。按统一操作程序制备菌株是微生物试验结果一致性的重要保证。试验菌种应是从国家菌种中心获得的标准菌种，经过实验室复活并在适宜的培养基中生长后保存.中国药典2010版药品微生物检验指导原则(*菌种保藏机构中国菌种保藏管理委员会（CCCCM）成立于1979年。下设7个菌种保藏管理中心及有关专业实验室，共12个单位实行统一领导，按专业分工管理。普通微生物菌种保藏管理中心（CCGMC）中国科学院微生物研究所中国科学院武汉病毒研究所农业微生物菌种保藏管理中心（ACCC）中国农业科学院土壤肥料研究所医学微生物菌种保藏管理中心（CMCC）中国医学科学院皮肤病研究所中国药品生物制品检定所中国预防医学科学院病毒研究所中国药典2010版药品微生物检验指导原则(*定性检验的方法验证中国药典2010版药品微生物检验指导原则(*1、专属性：是指检测样品中可能存在的特定微生物种类的能力。强调应关注样品存在对检验结果的影响在使用依赖培养技术（以微生物生长作为判断）的替代方法时，样品的存在会导致检验出现假阴性，应特别确认培养基的促生长试验及样品的存在对检验结果的影响。对于不依赖培养技术的替代方法，样品的存在还可能导致检验出现假阳性，应特别确认检测系统中的外来成分不得干扰试验，确认样品的存在不会对检验结果造成影响。采用替代方法进行控制菌的检验，还应选择与控制菌具有类似特性的菌株作为验证对象。中国药典2010版药品微生物检验指导原则(*2、检测限：是指在替代方法设定的检验条件下，样品中能被检出的微生物的最低数量，该数量是指在稀释或培养之前初始样品所含有的微生物数量，而不是指检验过程中某一环节的供试液中所含有的微生物数量。验证的关键是确定接种菌的最低数量（每单位不超过5cfu），分别用药典方法和替代方法对该菌进行检验，比较两种方法的差异。与国外药典规定相同，要求试验菌的接种量应能够在采用药典方法检验时，有50％的检出率。检测限验证至少应重复进行5次。中国药典2010版药品微生物检验指导原则(*3、重现性：是指相同的样品在正常的实验条件（如实验场所、实验人员、仪器、试剂的批次等）发生变化时，所得检验结果的精密度。反映了微生物检验方法在检验结果上抵抗操作和环境变化的能力。验证的关键是使接种菌的量在检测限以上，评价验证结果时，应排除样品均一性的影响4、耐用性：是指当方法参数有小的刻意变化时，检验结果不受影响的能力，为方法正常使用时的可靠性提供依据。对替代方法进行耐用性评价，确定方法操作的关键注意点。在开展了上述评价后，可以不必比较替代方法的耐用性与药典方法的差异。中国药典2010版药品微生物检验指导原则(*定量检验的方法验证中国药典2010版药品微生物检验指导原则(*1、准确度：是指替代方法的检验结果与药典方法检验结果的一致程度。准确度的确认应在检验的范围内。通常用微生物的回收率（％）来表示准确度。验证的菌浓度应该在检测范围内，一般应选择能够准确计数的最高浓度，系列稀释至较低浓度，并且至少应该有5种浓度，每种浓度重复检验5次。替代方法的回收率应该达到70％以上。当替代方法并不依赖微生物生长出菌落或出现混浊来进行定量时，可能出现回收率高于药典方法的情况，此时应结合专属性的内容对准确性进行评价。中国药典2010版药品微生物检验指导原则(*2、精密度：是指在检验范围内，对同一个均匀的样品多次重复取样测定，其检验结果的一致程度。通常采用标准偏差或相对标准偏差（变异系数）来表示。验证的菌浓度同准确度，每种浓度重复检验10次。可以接受的相对标准偏差（RSD）应不大于35％。一般来说，替代方法的相对标准偏差（RSD）应不大于药典方法。在该项目上，USP的规定是15％～35％，研究表明，当含菌浓度在30～300cfu/ml时，计数结果的RSD完全可能在15％以内，因此，指导原则中对该指标作了修改。中国药典2010版药品微生物检验指导原则(*