侵袭性真菌培养诊断操作指南解读.pptx

侵袭性真菌培养诊断

操作指南解读

四川省医学科学院.四川省人民医院

Email:yvhua2002@163.com

喻华

本标准由卫生部临床检验标准专业委员会提出

本标准起草单位：中国医学科

学院北京协和医院北京大学第

一医院复旦大学附属华山医院

本标准起草人：

徐英春李若瑜章强强王瑶王贺

余进郭莉娜张丽范欣

侵袭性真菌病临床实验室诊断操作规范

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侵袭性真菌病临床实验室诊断操作规范

中华人民共和国卫生行业标准xXTx00-m

培养基

用途

沙保弱葡萄糖琼脂培养基

真菌的常规培养

马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)

观察真菌菌落色素，用于鉴别真菌

心脑浸液葡萄糖血琼脂

深部真菌培养(二相性真菌)

放线菌酮一氯霉素琼脂

真菌的常规培养

玉米粉聚山梨酯一80琼脂

观察白假丝酵母菌的厚膜孢子

尿素琼脂

用生化反应鉴别真菌

(红色癣菌和石膏样癣菌)

有条件实验室平行接种显色培养基；为抑制细菌生长，培养基中可加入

氯霉素或庆大霉素。

常用真菌培养基

培养方法

▶推荐采用螺口管斜面培养法：标本处理后接种于培养基斜面中下部，封口，建议平行接种两管。

▶平板培养：三区划线接种，每平板只能接种一份标本。

▶怀疑双相真菌(如马内菲青霉)感染，应同时在28±1℃及35±1℃培养。

▶组织、脑脊液等标本，或怀疑罕见真菌或慢生长真菌(如英膜组织胞浆菌、隐球菌)感染时，建议至少培养1个月。

培养条件

▶通常28±1℃培养7天；

致病真菌

丝状真菌

质谱鉴定或基因测序显微镜检或小培养观察形态

确定种属

单一真菌生长

判断有无意义

污染菌

酵母样菌落

显色培养基或生化方法

真菌培养

一种以上真菌生长

判断政病菌及污染菌

真菌培养鉴定

致病真菌分纯

污染菌

困在严格防止污染条件下，组织标本及无菌标本中有任何真菌生长都有意义。

函非无菌标本，视情况而定：两个试管有同一形态真菌生

长；真菌镜检同时阳性者提示可能有临床意义；

仅一管生长，生长部位非接种部位，菌落为霉菌样则可能是污染。

国致病菌判定：

需结合标本直接镜检结果和患者临床症状体征、影像学及其它检查结果综合分析。

判断有无临床意义

图操作步骤：观察菌落形态及镜下形态。

丝状真菌镜下形态观察：通常采用透明胶带法。利用胶带先粘一定量菌丝，再粘在预先滴加乳酸酚棉兰的载玻片上，显微镜下观察孢子和菌丝的形态、特征、大小和排列等。

酵母菌镜下观察：采用生理盐水涂片法。

图原理：通过菌落形态以及显微镜下真菌孢子、菌丝、产孢等特征性结构进行初步判断真菌种属。

图材料：光学显微镜、透明胶带、载玻片、乳酸酚棉兰、无菌生理盐水、盖玻片等。

真菌培养物形态学鉴定

真菌培养物形态学鉴定

球拍菌丝

无隔菌丝

真菌培养物形态学鉴定

芽管形成试验

函原理：白念珠菌可形成芽管，其他念珠菌一般不形成芽管，因此用于白念珠菌的鉴定；

函操作步骤：将念珠菌接种于0.2-0.5ml人或动物血清中，37℃

孵育1.5-4小时，镜检观察有无芽管形成。需设立阳性对照

(白念珠菌)和阴性对照(热带念珠菌),但热带念珠菌在

血清中孵育6h或更久也可形成芽管。

函原理：显微镜下观察菌落的自然生长和产孢状态，利

于发现真菌特征性表现，一般用于丝状真菌鉴定。

图标本：真菌分纯菌株。

图材料：载玻片、盖玻片、灭菌器、镊子、V型或U型玻璃棒、无菌空平皿、马铃薯琼脂培养基、纱布或棉花、刀片等。

小培养形态学鉴定

将刀片消毒，在马铃薯琼脂培养基上切一小块约0.5cm2的琼脂块，放在灭菌载玻片上；

用接种针挑取待测菌株的少量菌丝(肉眼可见即可),分别接种在琼脂块的四角位置；

将灭菌后的盖玻片置于琼脂块表面；

s在无菌平皿中放入无菌的玻璃棒(或其它支持物),加适量无菌水或含水棉球、纱布，将载玻片放入无菌平皿的支持物上，盖上盖玻片；

28±1℃培养，每天观察至产孢良好或菌丝丰富时，提起盖玻片，移去琼脂块，分别将盖玻片和载玻片制片，显微镜观察。

小培养操作步骤

原理：念珠菌自身代谢产生的酶与相应显色底物反应，释放出

显色基团，从而使菌落呈现不同颜色。标本：可疑念珠菌属的菌株或怀疑念珠菌属感染的临床标本。材料：念珠菌显色培养基。操作步骤：将可疑菌株或临床标本接种于显色琼脂,30-37℃培养48小时，观察菌落颜色变化。质控：白念珠菌标准菌株或参考菌株。

显色培养基鉴定

绿色：白念珠菌；蓝灰色或