HJ 1016-2019 水质 致突变性的鉴别 蚕豆根尖微核试验法.docxVIP

i

目次

前言 ii

1适用范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4方法原理 1

5试剂和材料 2

6仪器和设备 3

7受试生物 3

8受试生物准备 3

9样品 4

10分析步骤 4

11结果计算与表示 6

12精密度 7

13质量保证和质量控制 7

14废物处理 8

附录A(资料性附录)有丝分裂各期细胞、根尖细胞微核计数区及微核判定参考图片 9

附录B(资料性附录)松滋青皮豆特性及保种 11

附录C(资料性附录)根尖处理皿参考图片 12

附录D(规范性附录)试样急性毒性预试验 13

附录E(资料性附录)Kruskal-Wallis检验方法 14

附录F(资料性附录)原始记录表和试验报告表 16

ii

前言

为贯彻《中华人民共和国环境保护法》和《中华人民共和国水污染防治法》,保护生态环境，保障人体健康，规范水样致突变性的鉴别方法，制定本标准。

本标准规定了鉴别地表水、地下水、生活污水和工业废水中致突变性的蚕豆根尖微核试验法。

本标准的附录D为规范性附录，附录A～附录C、附录E、附录F为资料性附录。本标准为首次发布。

本标准由生态环境部生态环境监测司、法规与标准司组织制订。

本标准起草单位：江苏省常州环境监测中心(江苏省环境保护水环境生物监测重点实验室)、中国环境科学研究院环境基准与风险评估国家重点实验室。

本标准验证单位：上海市环境监测中心、浙江省环境监测中心、江苏省环境监测中心、江苏省南京环境监测中心、江苏省苏州环境监测中心和江苏省泰州环境监测中心。

本标准生态环境部2019年4月13日批准。

本标准自2019年9月1日起实施。本标准由生态环境部解释。

1

水质致突变性的鉴别蚕豆根尖微核试验法

1适用范围

本标准规定了鉴别水样致突变性的蚕豆根尖微核试验法。

本标准适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水的致突变性鉴别。

2规范性引用文件

本标准引用了下列文件或其中的条款。凡是不注日期的引用文件，其有效版本适用于本标准。

GB/T6920水质pH值的测定玻璃电极法

HJ/T91地表水和污水监测技术规范HJ/T164地下水环境监测技术规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。3.1

微核micronuclei

真核细胞中，游离于主核之外的小核即为微核，其物质构成和特性与主核一致，大小一般为主核1/3以下，是染色体畸变的一种表现形式。

3.2

微核率micronucleusrate

某一试样检测若干根尖，每个根尖观察1000个有丝分裂间期细胞，所计微核数占观察细胞数的比率，以%计。

3.3

有丝分裂指数mitoticindex

同一根尖观察1000个细胞，处于有丝分裂期(包含前期、中期、后期、末期，见附录A图A.1)的细胞数占总细胞数的比率，以%计。

3.4

参比物质referencesubstance

验证测试方法敏感性和有效性的已知阳性对照物质，用于确定受试生物特性和试验条件未发生明显改变，保证试验可靠有效。

4方法原理

将经过浸种催根后长出的蚕豆初生根在试样中暴露一定时间，经恢复培养、固定、染色

2

后，制片镜检，统计蚕豆根尖初生分生组织区(参见附录A图A.2)细胞微核率。致突变物可作用于细胞核物质，导致有丝分裂期染色体断裂形成断片、整条染色体脱离纺锤丝、纺锤丝牵引染色体移动的功能受损。这些移动受到影响的染色体断片或整条染色体不能随正常染色体移向细胞两极形成子细胞核，而滞留细胞质中形成子细胞微核并引起其数量增加。比较试样与空白试样蚕豆根尖细胞微核率是否显著增加，可判定样品是否存在致突变性。

5试剂和材料

除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水为新制备的去离子水或蒸馏水，电导率(25℃)≤0.50mS/m、pH(25℃)在5.5～7.5之间。

5.1调温水：用于浸种(8.2)、催根(8.3)、根尖处理(10.1)的实验用水，需提前放置于恒温培养箱(6.3)中，25℃±1℃平衡至恒温备用。

5.2盐酸：p(HCl)=1.18g/ml。

5.3氢氧化钠(NaOH)。

5.4乙酸：p(C?H?O?)=1.05g/ml。

5.5无水乙醇：p(C?H?O)=0.79g/ml。

5.6碱性品红(C?oH??CIN?)。

5.7偏重亚硫酸钠(N