HI-HA试验原理（必威体育精装版文档）.pptVIP

血清学诊断禽流感、新城疫（HA、HI）HA、HI依据标准《高致病性禽流感诊断技术》GB/T18936-2003《鸡新城疫检测技术规范》GB/T16550-1996血凝原理血凝抑制原理血凝与血凝抑制试验基本原理病毒能够与鸡红细胞发生凝集现象，即为血凝这种红细胞凝集现象可被特异性免疫血清所抑制，即红细胞凝集抑制试验血凝试验（血凝效价的滴定)血凝试验结果判定效价判定：凝集特别显著：“＋＋＋＋”凝集现象次之：“＋＋＋”凝集清楚可见：“＋＋”稍显凝集者：“＋”血凝效价：呈“＋＋＋＋”凝集时的最高稀释度。此时的稀释度即为1个血凝单位。结果判定将板倾斜，观察红细胞有无呈泪滴状流淌完全血凝(不流淌)的抗原或病毒最高稀释倍数代表一个血凝单位(HAU)终点稀释倍数除以4即为含4HAU的抗原的稀释倍数。例如，如果血凝的终点滴度为1:256，则4HAU抗原的稀释倍数应是1/64(256除以4)思考HA为什么加补充液为什么选用4HAU血凝抑制试验结果判定测定孔：RBC沉于孔底中心，呈纽扣状(+)、凝集（-）血清对照孔：RBC沉于孔底，无自凝病毒对照孔：凝集RBC对照孔：无自凝血凝抑制试验效价：呈完全血凝抑制使的最高血清稀释度。结果判定只有阴性对照孔血清滴度不大于2log2,阳性对照孔血清误差不超过1个滴度，试验结果才有效。HI价小于或等于3log2判定HI试验阴性;HI价等于4log2为可疑，需重复试验;HI价大于或等于5log2为阳性。NDHI的判读注意事项不同实验室结果可以不同要有阳阴性对照了解现场生产背景临床解剖资料免疫情况、采血周龄应用

检测血清中的抗体水平。鉴定病毒。辅助诊断病毒性疾病。作为适时免疫的辅助手段，能避免免疫失败、免疫空挡及重复免疫造成的损失。禽流感免疫效果监测弱毒疫苗的免疫效果判定商品代肉雏鸡第二次免疫14天后，进行免疫效果监测。鸡群免疫抗体转阳率≥50%判定为合格。灭活疫苗的免疫效果判定家禽免疫后21天进行免疫效果监测。HI抗体效价≥24为免疫合格。存栏禽群免疫抗体合格率必须≥70%判定合格。合理选择抗原：H9、H5、H7H5:针对Re-1和Re-4株疫苗免疫采用相应抗原同一亚型的禽流感病毒制成的抗原，如果毒株来源不同，则可能会存在抗原性差异，从而使检测同一血清的结果有差别一般来讲，疫苗种毒株如果与抗原所用毒株相同时，则所测得的HI效价较高禽流感HI应注意的问题发病前后ND抗体的变化NDHI与临床症状的关系NDHI4 感染100％死亡NDHI4-7 感染发病90％不死NDHI6-8 感染发病100%不死NDHI8-10 感染产蛋下降、 NDHI上升NDHI11-13 感染只见NDHI上升NDHI13-15 病毒无法侵入HI试验注意事项反应试剂要按规定保存和使用。为避免反复冻融和细菌污染，可以无菌操作将试剂分装成小包装。冻干的试剂应按照说明中规定的体积重新溶解并保存。要避免杂菌污染，因为污染所造成的非流感起源的凝集素也可与所有抗血清发生非特异反应。HI试验注意事项反应温度不能太高，若在37℃（如温箱）下进行，会影响检测结果。标准抗原稀释液浓度必须为4个HA单位/25μl，必须每天制备并在试验前滴定。孵育时间要严格控制。红细胞对照完全沉淀时要迅速判读。在一些病毒株中可见红细胞从病毒中解脱，如果有这种情况的发生，要提前判定或4℃下孵育。红细胞悬液要始终符合标准，使用时应随时振荡。稀释液应选用PBS，反应体系为0.075ml.HI试验注意事项影响HA和HI的因素被检血清腐败变性。血样采集后要及时分离血清，分离后即时测定或放置在4℃冰箱内保存，不可过久，要力求新鲜。缓冲液配制时间过长，pH值发生变化，使凝集不明显。缓冲液（PBS）尽可能现配现用，浓度和酸碱度要准确病毒悬液和红细胞悬液在使用前没有摇匀，加入时浓度高低不一，人为造成误差。因此抗原和红细胞使用前一定要摇匀，保证每一孔中加入的浓度准确一致。

影响HA和HI的因素配制红细胞悬液应采集2只以上成年公鸡的血一般要求用非免疫公鸡，如果用免疫公鸡代替，但应增加洗涤次数和时间在使用微量移液器时，每个吸头要安装牢固，防止漏气移液器滴头不要离开液面，防止产生气泡，造成移液量不准使用过和未使用过的加样头分开放影响HA和HI的因素微量血凝板的清洗，对试验结果有很大的影响。使用过的凝集板，要按程序清