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肠道病毒标本的采集、运送、保存和实验室检测

为及时、科学地采集和运送手足口病标本，规范实验室检测程序和检测方法，

提高检测质量，特制定本方案。

1采集对象

1.1肠道病毒感染者，多表现为手足口病、疱疹性咽峡炎、无菌性脑膜炎等，

患者多见5岁以下儿童。

1.2因调查需要的密切接触者。

2采样液

2.1pH7.4～7.6HANK氏平衡盐（含0.5%的牛血清白蛋白）。

2.2pH7.4～7.6的Eagle’sMEM培养液（含0.5%的牛血清白蛋白）。

3标本种类及采集

2.1咽拭子：用聚丙烯纤维头的塑料杆拭子同时擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，

将拭子头浸入含3ml采样液的采样管中。

2.2手足口病患者疱内渗出液：用聚丙烯纤维头的塑料杆拭子涂擦疱内渗出液，

将拭子头浸入含3ml采样液的采样管中。

2.3患者粪便：采集5～10g粪便置于15ml空采样管中。

2.4脑膜炎患者的脑脊液：采集好标本后置于15ml空采样管中。

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2.5心包炎患者的心包积液：采集好标本后置于15ml空采样管中。

2.6血清标本：须采集急性期、恢复期双份血清。用真空负压采血管采集血液

标本5ml，室温静置30分钟，1500～2000rpm离心10分钟，收集血清于2ml无

菌螺口塑料管中。

标本采集好后，应在采样管上做好标记，并注明标本的种类，同时及时

填写采样表，要求信息完整。

4标本保存及运送

标本应在冷藏的条件下尽快进行送实验室检测，24小时内能检测的标本可置于

4℃保存，24小时内无法检测的标本则应置于-70℃或以下保存。如无－70℃保

存条件，则于－20℃冰箱暂存。血清可在4℃存放3天、-20℃以下长期保存。

标本运送期间应避免反复冻融。

5标本的实验室检测

5.1核酸检测：方法包括RT-PCR和Real-TimeRT-PCR，首先使用肠道病毒通

用引物进行快速筛查，得到阳性结果后使用EV71、CoxA16等引物和探针进行分

型。

5.2病毒分离及鉴定：采用Vero、Hep2和RD细胞进行病毒的分离，第一代7

日内仍然为阴性的标本需继续盲传一代。病毒的鉴定采用中和试验（NT）和间接

免疫荧光（IFA）法。

5.3血清学检测：采用组合血清进行血清中和试验，双份血清具4倍增长才具

有诊断意义。

6肠道病毒感染病例采样登记表

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肠道病毒感染病例采样登记表

临床诊断标本种类

咽粪脑心

编患者性

出发就采其疱急恢

体

生病诊样手疱疹无菌内性复

温

脑干

年日日日足口性咽性脑